人血小板内皮细胞黏附分子-1

二、注意事项
1.  此试剂为体外检测试剂,效期内使用,试剂应视为传染物,不同总批号的试剂不能混用。
使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟,
浓缩洗涤液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟。
浓缩样品稀释液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟
若24小时内进行实验,标本可存放于2～8℃。不需及时实验,标本-20℃保存,避免反复冻融。
在反复清洗微孔板,并扣干微孔中的残余液体,否则将降低度,造成吸光度偏离的假像。
加样完毕后,应注意轻微摇动微孔反应条,以便使孔中的液体充分混匀。
试剂盒保存于2～8℃,请勿冷冻,有效期请见盒内标示。

三、实验前准备
1．使用前应将盒内各试剂取出,室温放置至少30分钟。
2．准备各种实验仪器及材料,如微量移液器,吸头,医用蒸馏水等
3．浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液
4．浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液
5．用应用样品稀释液来稀释样品,按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中,充分混匀待用。）

人血小板内皮细胞黏附分子-1

四、操 作 步 骤
1．取出酶标板,设空白孔,依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中（空白孔视为0号标准品,用医用蒸馏水替代）
2、分别标记样品编号,加入100μl的稀释样品于空白微孔中（不同的样本采用不同的吸头）。
3、将酶标板置于37℃温育30分钟；
4、将酶标板板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体;
5、每个孔中加满应用洗涤液后,轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去,在吸水纸上将酶标板拍干。
6、重复第5个步骤5次,在吸水纸上将酶标板拍干。
7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。
8、将96孔板置于37℃温育30分钟。
9、将酶标板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体。
10、每个孔中再次加满洗涤应用液后,室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去,在吸水纸上将酶标板拍干。
11、重复第5个步骤5次,在吸水纸上将酶标板拍干。
12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。（A液、B液采用不同的吸头加样）
13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。
14、每个微孔中加入50μl的终止液,轻轻振荡混匀。
15、在酶标仪上,450nm处测定OD!显色后,15分钟内进行测定。
16、根据制备的标准曲线,计算样本含量

人血小板内皮细胞黏附分子-1

五、结 果 判 断
1.仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；
2、检测值范围：0－160pg/ml
3、敏感度：1.0 pg/ml
Goat anti-Rabbit IgG/Cy7 荧光素Cy7标记羊抗兔IgG 0.1ml
Goat anti-mouse IgG/Cy7 荧光素Cy7标记羊抗小鼠IgG 0.1ml
OPG （Osteoprotegerin） 骨保护蛋白/护骨素抗体 0.1ml
OPG （Osteoprotegerin） 骨保护蛋白/护骨素抗体 0.2ml
OPGL/RANKL/CD254/TNFSF11 （Osteoprotegerin ligand） 骨保护蛋白配体抗体 0.1ml
OPGL/RANKL/CD254/TNFSF11 （Osteoprotegerin ligand） 骨保护蛋白配体抗体 0.2ml
OPN（osteopontin） 骨桥蛋白抗体 0.1ml
OPN（osteopontin） 骨桥蛋白抗体 0.2ml