取芽孢数在30cfu/mL-300cfu/mL的稀释级别的试管（10^-4）震荡30s,每支稀释管平行制备2个平皿,每皿加1mL菌悬液,注入15mL-20mL温度不超过45℃融化的胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）。等待琼脂凝固后,倒置于30℃-35℃培养箱中培养48h-72h后计数。

总芽孢数cfu/片（支）=平均菌落数×稀释倍数。

1、切勿将生物指示剂进行紫外照射消毒,建议对初级包装进行擦拭。

2、环氧乙烷灭菌生物指示剂芽孢计数,建议使用含0.1%聚山梨酯80的无菌纯化水进行稀释。

3、吸取含纸质载体的菌液时,避免纤维堵枪头,导致移液不准确。

4、建议以单片（支）生物指示剂的形式进行计数,确保每片（支）生物指示剂计数结果均符合要求。

5、建议使用玻璃珠（4mm-6mm）对纸质载体进行打散处理。

6、芽孢计数过程中必须进行热激活处理：温度80℃-85℃,时间10min。