ELISA中常见的假阴性的因素
在ELISA实验中,假阴性的常见原因主要包括内源性因素、外源性因素、操作因素和试剂盒自身因素。为了减少假阴性的发生,需要从多个方面进行预防和解决。
内源性因素
基因突变:个别个体的基因突变可能导致检测结果为假阴性,尤其是当检测用抗体的结合位点在突变区时。
待检物含量偏低:样本内被测物的浓度较低,易造成假阴性结果,如某些疾病发展初期被检物浓度低于检测限。
外源性因素
样品反复冻融:血清样品的反复冻融会使血清中的抗体效价下降,造成假阴性出现。
样品处理不当:标本用肝素或EDTA等抗凝剂处理,高浓度肝素具有强大的负电荷,能吸附酶标记物不易洗脱,导致假阴性结果。
样品存放不当:标本放置时间过长,抗原或抗体免疫活性减弱,亦可出现假阴性。
操作因素
加样不准确:样品稀释液多加或血清少加,会降低血清中待检IgG的吸附性,导致假阴性结果。
洗涤不当:洗涤条件一致性较差或洗涤机使用不当,血清中残留的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易造成"花板",导致假阳性或假阴性。
孵育问题:温箱调温器异常使温箱温度降低或孵育时反复打开温箱门,造成孵育时反应不充分,出现假阳性结果。
试剂盒自身因素
试剂盒敏感性:某些厂家为了提高检测的特异性,会降低试剂盒的敏感性,从而造成在检测过程中假阴性的出现。
为了减少ELISA实验中的假阴性,需要从标本采集、处理、保存到实验操作和试剂盒选择等多个环节进行严格控制和管理。这包括优化标本处理流程、提高操作一致性、选择高质量的试剂盒等措施。通过这些措施,可以有效降低ELISA实验中假阴性的发生率,提高实验结果的准确性和可靠性。x
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