ELISA检测结果不理想的原因?

ELISA作为经典的免疫检测方法,看起来很平常,然而真正做好它并不容易。BUNSEN本生专注科研试剂盒的研发及销售多年,涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域,满足您实验所需,以实现与客户的双赢,完善的库存及供应体系以及高效稳定的专业技术,保证产品均能现货供应。有哪些方法可以借鉴呢?恒远技术人员总结了以下几点：

一、确定您的样本类型和试剂盒可以兼容

常见样本类型有血清,血浆,细胞培养上清,如果是厂家实验验证过的,可根据产品说明购买使用。

注意：血浆制备用到的抗凝剂有 EDTA、柠檬酸盐、肝素等多种,相应的血浆性质存在差异,需单独确认兼容性

二、试剂盒检测范围需要匹配样本中标志物浓度

elisa试剂盒的定量检测范围需参考标准曲线,在标准曲线低和最高浓度区间内属于线性范围,其中的值是可信和可定量的。浓度高于线性范围的样品要稀释到线性范围内来测量,而浓度低于线性范围的样品,其测量值不能用于计算浓度,只能用做参考。有一种常见的相关情况是：健康人样本中很多标志物的浓度偏低,测量值低于标准曲线低值。

三、样本收集有讲究

以血清为例,样本收集可参考试剂盒说明书,但需注意以下要点。样本尽量用无菌管收集,避免细菌的酶类和代谢产品对结果的影响。采集过程要避免溶血,因为红细胞溶解释放的活性物质可能会影响检测。保存过程中如有沉淀,应离心后取上清液。样本若不立即测定,建议按照每次使用量分装保存在 -20℃,每次检测使用一管,即避免交叉污染和反复冻融,有能保证检测结果的平行可比性。

四、实验前要准备好相应试剂

提前将所有试剂平衡到室温环境,这个过程大致需半小时左右。洗液是浓缩液,如有结晶析出,需溶解后再进行稀释。A、B 两管显色底物在使用前15分钟按 1:1 配成混合液。为保证蛋白标准品溶液配制质量,蛋白标准品为冻干粉,重溶前需将管子离心,加入说明书的缓冲液,慢速在摇床上摇匀或颠倒混匀,至少 15 分钟,不建议用枪头吹打。溶解后如需保存,按每次使用量分装后根据说明书要求的温度保存。梯度稀释蛋白标准品时,建议用聚丙烯管(对蛋白吸附力很低),每步都要充分混匀且更换新枪头,确保梯度准确性。

五、仪器设备的准备

相关设备包括移液器、洗板机/摇床和酶标仪。移液器的准确性对于ELISA实验结果的可靠性十分关键,需要确保定期校准维护。摇床的使用是为了让反应体系快速达到平衡,获得稳定、可重复的结果。不用摇床对实验通常的影响是,OD 值低,CV 大。酶标仪等设备使用前提前15分钟开机预热。

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