小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽ELISA试剂盒说明书

一、产品概述

小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)ELISA试剂盒是用于定量检测小鼠血清、血浆或其他相关生物样品中小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽浓度的体外诊断试剂。本试剂盒基于酶联免疫吸附法(ELISA)原理,具有高灵敏度、高特异性和操作简便等特点,适用于科研实验、临床诊断以及药物研发等领域。

二、产品组成

1.预包被PINP抗体的96孔板

2.PINP标准品(冻干粉)

3.PINP检测抗体

4.辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗

5.显色液A(TMB)

6.显色液B(H₂O₂)

7.终止液(2N H₂SO₄)

8.浓缩洗涤液(20倍)

9.样本稀释液

10.酶标仪用覆盖膜

11.试剂盒说明书

三、保存与运输

1.试剂盒应储存于2-8℃避光环境中,有效期为XX个月。

2.标准品、检测抗体、二抗和酶标板切勿反复冻融。

3.运输过程中应保持试剂盒低温状态,避免阳光直射和剧烈震动。

四、检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法检测小鼠血清或血浆中的PINP。将PINP抗体包被于96孔板上,加入待测样本和标准品,样本中的PINP与包被抗体结合,再加入PINP检测抗体,形成抗体-PINP-抗体复合物,最后加入HRP标记的二抗,通过显色反应,利用酶标仪测定OD值,根据标准曲线计算待测样本中PINP的浓度。

五、操作步骤

1.准备工作：提前30分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。用蒸馏水或去离子水将洗涤液稀释至工作浓度。

2.标准品制备：用样本稀释液将PINP标准品稀释成不同浓度的标准品溶液。

3.加样：分别将不同浓度的标准品溶液和待测样本加入孔板中,每孔100μL,设置空白对照孔,轻摇混匀。

4.温育：用封板膜封板后,置37℃温育30分钟。

5.洗涤：揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μL,空白孔除外。

7.温育：再次用封板膜封板后,置37℃温育30分钟。

8.洗涤：重复步骤5的洗涤操作。

9.显色：每孔先加入显色液A 50μL,再加入显色液B 50μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。

10.终止：每孔加终止液50μL,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定：以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

六、结果计算与判断

1.根据标准品OD值和对应浓度绘制标准曲线,计算出标准曲线的回归方程。

2.将待测样本的OD值代入回归方程,计算出待测样本中PINP的浓度。

3.结果判断：根据正常参考值范围,判断待测样本中小鼠PINP的水平是否正常。

七、注意事项

1.严格按照操作步骤进行,避免交叉污染。

2.洗涤过程中要充分拍干孔板,避免残留洗涤液影响实验结果。

3.显色反应时间应严格控制,避免显色时间过长或过短导致结果不准确。

4.若样本浓度超出线性范围,需适当稀释后重新测定。

5.试剂盒为一次性使用产品,不可重复使用。

八、临床意义

小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)是骨形成过程中的重要标志物之一,其浓度的变化可反映骨代谢的状态。因此,通过检测小鼠血清或血浆中的PINP浓度,可评估小鼠的骨代谢状况,为骨质疏松、骨折等疾病的诊断、治疗和预防提供重要依据。

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