酶联免疫吸附测定（ELISA）是应用广泛的免疫测定类型。 ELISA 是一种快速测试,用于检测样品中抗原或抗体的存在和数量。小鼠ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结如下：

一、选择试剂

选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

二、加样

可能原因：

1)血清或血浆标本分离不好即进行加样!2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)!3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

解决办法：

1,标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。

2,加样后及时放入孵箱。

3,加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4,如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

5,ELISA试剂盒标本较多时,请分批操作。

三、 孵育

可能原因：

1,孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗che底;

2,孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗che底。

解决办法：

1,贴封片或加盖;

2,按说明步骤严格控制操作时间。

四、洗板

可能原因：

1,采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。

2,采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不che底;洗板针堵塞,抽吸不wan全;洗板不畅,导致洗板效果差。

3,反应板过多造成洗板等待时间长。

解决办法：

1,ELISA试剂盒保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后zui hao在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;

2,合理安排,或多用几台洗板机。