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纯化小技巧 | MaXtar® COLL 400/700病毒应用分享

来源: 百林科医药科技(上海)有限公司 2024年05月30日 13:19

百林科多模式层析填料家族中
有这么一类特殊的填料,凭借其独特的填料结构
发挥凝胶过滤吸附层析的双重特性
专为超大分子设计。

包括MaXtar® COLL 400、MaXtar® COLL 700两种,分别适用于分子量超过400 KD和700 KD的超大分子
MaXtar® COLL 400/700产品简介
独特的双层结构设计,外壳是多孔的钝化层 ,确保 400 KD或700 KD 以上的大分子不会进孔,直接走外水流穿;核心是偶联了同时具有疏水和吸附负电荷作用基团的球形内核,最大程度结合宿主蛋白、 核酸等杂质。具有明显优势:
• 以流穿模式处理400 KD 或700 KD 以上的大分子,工艺优化更容易,更方便线性放大。
• 改良的MaXtar® 基架具有更强刚性,因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率。
• 相比于传统的凝胶过滤层析,拥有更大的上样量,更高流速,生产效率大大提升。
• 耐受范围广,化学稳定性好。
• 适用于病毒及类病毒颗粒等生物大分子分离。
如何选择MaXtar® COLL 400/700
MaXtar® COLL 400:如有病毒/大分子在MaXtar® COLL 700上收率不佳,有明显吸附现象,可尝试选择更小孔径的MaXtar® COLL 400进行优化。
MaXtar® COLL 700:主要适用分子量大于700KD(约30nm)的病毒/大分子。
MaXtar® COLL 400/700应用案例分享
案例一:MaXtar® COLL 400在VLP的应用

图1:MaXtar® COLL 400纯化VLP图谱
样品:VLP(单体60kDa,120聚体)
柱体积:30ml
上样量:300ml
流速:7ml/min

表1:MaXtar® COLL 400纯化结果

小结:结合层析图谱和胶图可见,纯度有明显提高,杂质去除明显。
案例二:MaXtar® COLL 700在慢病毒中的应用
建议测试的工艺条件
样品信息:浓缩后样品
平衡Buffer 20 mM PB,150 mM NaCl ,pH 7.5或1×DPBS,pH 7.5
CIP Buffer 1 M NaOH,30%异丙醇

图2:MaXtar® COLL 700纯化慢病毒图谱

表2:MaXtar® COLL 700纯化结果

小结:回收率和杂质去除水平,均符合预期。
MaXtar® COLL 400/700应用过程中的Tips
◆ 为最大程度发挥COLL系列内部的多种配基吸杂效果,建议在缓冲液中添加100~150mM NaCl;
◆ 由于杂质与内部配基之间的高效多模式结合,需要对填料进行有效清洁,建议使用1M NaOH, 30%异丙醇。
◆ 不推荐使用柠檬酸盐缓冲液,因为柠檬酸离子会与配基相互作用。

百林科多种层析填料
均可申请试用,
扫描立刻申请样品

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