小鼠ELISA试剂盒试验时的保温及实验注意事项

小鼠ELISA试剂盒试验时通过酶反应将抗原抗体反应信号放大,从而提高了检测灵敏度,而且还能通过产生有颜色的底物用仪器或肉眼识别,此法一般在酶联板上或膜上进行,进行一次检测需要4h左右。

在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育,有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。

温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达峰值。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更全,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜,以形成最多的沉淀。但因所需时间太长,在ELISA中一般不予采用。

保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外,一般均采用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中ELISA板底应贴着水面,使温度迅速平衡。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应,操作时的室温应严格限制在规定的范围内,标准室温温度是指20-25℃,但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时,ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点,一个人操作时,一次不宜多于两块板同时测定。

酶联免疫试剂盒注意事项：

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8.本试剂不同批号组分不得混用。

9.如需代测或者样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间避免反复冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。10.试剂使用须知：

11.(1)请参照相关法规、文献、MSDS等信息,理解并掌握好试剂的特性,再进行安全操作。

12.(2)通常购买试剂时一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话,更加注意其他保管和管理。

13.(3)万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物,不要或者旧的试剂,应按照相关法律法规正当处理。

14.(4)购买后,请务必确认标签上的注意事项;做好预防颠倒,摔坏的措施和管理体制;在使用前再次确认标签上的注意事项,做好必要的安全对策;对没有标明其危害特性、有害特性的,也要慎重地进行操作;必须带好防护用具,小心翼翼进行操作。

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