口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)又称口疮热,是由口蹄疫病毒引起的主要侵害偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病。检测特异性口蹄疫抗体可作为该病疫苗免疫状况及辅助诊断指标。
猪口蹄疫间接血凝检测试剂的操作说明：
操作程序
1.待检血清(每头约0.5ml血清即可)56℃水浴灭活30分钟。
2.在血凝板上1-6排的1-9孔；第7排的1-3孔第5-6孔；第8排的1-12孔各加稀释液30微升。
3.取1号待检血清30微升加入第1排第1孔,并将塑咀插入孔底,右手姆指轻压弹簧1-2次混匀(避免产生过多的气泡),从该孔取出30微升移入第2孔,混匀后取出30微升移入第3孔……直至第9孔混匀后取出30微升丢弃。此时第1排1-9孔待检血清的稀释度(稀释倍数)依次为：1：2(1)1：4(2)1：8(3)1：16(4)1：32(5)1：64(6)1：128(7)1：256(8)1：512(9)。取2号待检血清加入第2排：取3号待检血清加入第3排……均按上法稀释,注意！每取一份血清时,必须更换塑咀一个。
4.在血凝板的第7排第1孔加阴性血清30微升、对倍稀释至第3孔,混匀后从该孔取出30微升丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1：2(1)1：4(2)1：8(3)。第5-6孔为稀释液对照。
5.在血凝板的第8排第l孔加阳性血清30微升,对倍稀释至第12孔,混匀后从该孔取出30微升丢弃。此时阳性血清的稀释倍数依次为1：2-1：4096。
6.被检血清各孔、阴性对照血清各孔、阳性对照各孔、稀释液对照孔均各加血凝抗原(充分摇匀,瓶底应无血球沉淀)30微升。
7.将血凝板置于微量振荡器上振荡1-2分钟,如无振荡器,用手轻轻摇匀亦可,然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀,不出现血球沉淀为合格。盖上玻板,37℃下静置1-1.5小时或常温下3小时左右判定结果,也可延至翌日判定。
结果判断
1.对照试验：应在对照试验结果有效的前提下,来判定待检血清样本的结果。
阴性对照血清1：8孔,稀释液对照孔,均应无凝集(血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点),或仅出现"+"凝集(血球大部沉于孔底,边缘稍有少量血球悬浮)。
阳性血清对照1：2–l：256各孔应出现"++～++++"凝集为合格,(少量血球沉入孔底,大部血球悬浮于孔内)。
2.待检血清：以呈现"++"凝集的zui大稀释倍数为该份血清的抗体效价。例如1号待检血清l-5孔呈现"++ ～++++"凝集,6-7孔呈现"++"凝集,第8孔呈现"+"凝集,第9孔无凝集,那么就可判定该份血清的口蹄疫抗体效价为1：128。
3.抗体效价与抗感染的关系：接种口蹄疫疫苗的猪群免疫抗体效价达到1：128以上,牛群、羊群免疫抗体效价达到1：256以上为免疫合格。
注意事项
1.严重溶血或严重污染的血清样品不宜检测,以免发生非特异性反应。
2.本法可单独检测口蹄疫抗体水平,也可同步检测口蹄疫免疫抗体水平,猪水泡病免疫抗体水平。
3.液体血凝抗原4-8℃保存(切勿冻结),有效期4个月；阴阳性对照血清；-15～-20℃保存,有效期1年。
4.勿用90°和130°血凝扳,严禁使用一次性血凝板,以免误判结果。
5.用过的血凝板应及时在水下冲尽血球。再用蒸馏水或去离子水冲洗2次,甩干水份放37℃恒温箱内干燥备用。检测用具应煮沸消毒,37℃干燥备用。血凝板太脏,可浸泡在5%盐酸液内,48小时捞出后清水冲净。
6.每次检测只做一份阴性、阳性和稀释液对照。
"-"表示*不凝集成0–10%血球凝集。
"+"表示10-25%血球凝集"+++"表示75%血球凝集。
"++"表示50%血球凝集"++++"表示90-100%血球凝集。
7.用不同批次的血凝抗原检测同一份血清时,应事先用阳性血清准确测定各批次血凝抗原的效价,取抗原效价相同或相近的血凝抗原检测待检血清抗体水平的结果是基本*的,如果血凝抗原效价差别很大用来检测同一血清样品,肯定会出现检测结果不*。
8.收到本试剂盒时,应立即打开包装,取出血凝抗原瓶,用力摇动,使粘附在瓶盖上的红细胞摇下,否则易出现沉渣,影响使用效果。
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