随着新春的假期渐渐远去,我们正式迎来龙年工作日程。在这开年之际,愿所有的努力和汗水都能换来满满的收获,今天我们就来一起迎接 CHO 细胞培养规模放大的挑战,探索培养奥秘。
CHO 细胞,以其独特的优势,在生物制药领域中扮演着举足轻重的角色。因其能够快速、高水平地表达多种重组蛋白,使用悬浮培养工艺易于放大培养,CHO 细胞在生物制药领域中被广泛应用于生产治疗型蛋白。但由于规模放大过程中各参数间的调整过于复杂,细胞培养系统的放大仍然是一门通常依靠反复试验来确定最佳工艺参数和操作策略的艺术。
关键工艺条件
通气
在哺乳动物细胞生物反应器中,通气是一个关键组成部分,特别是在高细胞密度下操作时,因为需要向细胞提供足够的氧气,同时必须去除二氧化碳,以防止其在培养液中积累。
图 / 哺乳动物细胞培养中的常见通气策略
氧气
在 CHO 细胞培养中,溶氧水平通常保持在空气饱和度的 10% 到 80% 之间。过高的氧浓度会导致活性氧 (ROS) 的积累,这会导致线粒体呼吸链和细胞内氧化还原的改变,最终导致细胞生长抑制和特异性生产力下降。另一方面,低氧条件也会诱导 ROS 积累。
氧气传质系数 (kLa) 用于衡量系统的氧气传输能力。kLa 主要与单位体积功率输入 (P/V) 和表观气体速度 (vs) 相关,其中 K 是常数,指数 α 和 β 分别约为 0.4 和 0.5,气泡大小、混合速度、气体流速、体积和生物反应器几何形状等工艺参数都会影响 kLa。
二氧化碳
在哺乳动物细胞培养中,溶解的二氧化碳 (pCO2) 水平通常保持在 4%-10% 的CO2饱和度 (30-70 mmHg)。高浓度的溶解 CO2 (150–200 mmHg) 会对多种哺乳动物细胞的细胞生长和生产力产生不利影响。在 CHO 细胞培养中,高 pCO2 水平可抑制细胞生长、细胞生产力并改变产品质量。
CHO-K1Q 细胞株推荐培养参数
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复苏时按 5*10^5 cells/ml 密度接种更利于细胞恢复；
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传代时细胞密度应控制在1.8-2.5x10^6 cells/m,避免高密度培养(> 3x10^6 cells/ml) 影响后续转染效果；
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传代培养时需添加 4-8mM 谷氨酰胺培养；
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培养条件：37℃,5%CO2, 26mm 125rpm 或 50mm 90 rpm 如摇床振幅不同,可按公式换算：离心力(FC)=转速的平方(rpm2)x 振幅(φ)。
CHO-K1Q 培养双姝
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