本篇为此一次性使用系统干货分享系列的第3篇
在生物制药行业中,从R&D(研发)到cGMP临床试验,再到商业化生产,上游工艺中一次性系统的引入需要保证细胞保持卓越且稳定一致的生长性能。
因此,对处在行业上游的生物技术企业而言,提供的工艺解决方案和产品需确保细胞稳定一致的生长,这一点至关重要,并且,除了需保证细胞稳定一致的生长外,为了提高最终药品产量,行业目前正朝着提高细胞培养密度,增加蛋白生产滴度两个方向发展,这也对相关生物技术企业提出了更高的要求。
近些年,随着一次性技术进入到细胞培养工艺中,市场上偶有发现细胞生长情况出现不一致的现象。经研究,来自安进公司的Hammond等人发现了一种会影响细胞生长的降解产物,那就是：双1(2,4-二叔丁基苯基)磷酸酯(bDtBPP)。
带你了解这个"神秘"的bDtBPP的
前世今生
一次性工艺袋中最核心的原材料便是生物薄膜,而薄膜的原材料是各种聚合物,通俗讲就是塑料粒子。大量的塑料粒子通过共挤工艺继而形成工艺袋所需的生物薄膜。
通常情况下,为保护聚合物在薄膜挤出过程中和伽马射线照射过程中不被氧化,生产商会在塑料粒子中加入抗氧化剂,从而防止薄膜在加工过程及使用过程中因降解造成的性能下降。
抗氧化剂分很多种,主要品类是受阻酚类和亚磷酸酯类,通常两者会配合使用。其中显著助影响细胞培养的是亚磷酸酯类抗氧化剂中的一种,叫TBPP,也就是168。事实上168本身并不会影响细胞生长和培养,但它经过辐照后产生的子产物bDtBPP会显著抑制细胞生长。
所以,为了保证膜材性能,抗氧化剂在生物薄膜中是必然存在的,但只要在原料选择及制膜过程中严格控制168的浓度和配方,生产出的生物薄膜对细胞培养便没有影响。
看到这里,屏幕前的你可能会问"那你们乐纯生物的LeKrius®生物工艺薄膜如何呢？"
LeKrius®生物工艺薄膜(以下简称"LeKrius®膜")是乐纯生物拥有自主知识产权的一款生物薄膜,从原材料选择到制膜配方再到生产供应皆由乐纯生物自主控制。
LeKrius®生物工艺薄膜
此款工艺薄膜在生产制造过程中不添加任何抗氧化剂,从源头便避免了对细胞培养的影响。除此之外,我们还对LeKrius®膜做了细胞生长实验和蛋白吸附实验,并就膜材对细胞培养的影响做了充分的验证。
LeKrius®生物工艺袋
今天,我们就来用Show一下具体的实验数据！
01
细胞培养实验
|实验目的
测试不同膜材对CHO K1及 CHO DG44 细胞生长密度及细胞活率影响
|
实验参数
细胞种类：CHO K1及 CHO DG44
培养基提取条件：37℃,3 days
面积体积比：3 cm2/mL
实验型号：
•
LeKrius®膜
•
某同类型膜
•
阴性瓶子对照
|CHO K1细胞密度及活率实验结果
CHO K1细胞株培养实验结论：
活细胞密度与瓶子培养基本持平 ,优于某同类型膜；
在14天细胞培养过程中,细胞活率接近。
|CHO DG44细胞密度及活率实验结果
实验结论：
以CHO DG44细胞株的活细胞密度、细胞活率数据来看,使用LeKrius®️膜进行细胞培养性能充分匹配工艺需求；LeKrius®️膜可保持较高细胞活率,并不会随培养时间发生明显变化。
02
蛋白吸附实验
|实验目的
通常情况下,培养基里会有很多蛋白添加,如果可以减少吸附,将会保证细胞培养效率
|实验参数
①以膜材制成2L储液袋,经25-40kGy伽马辐照；
②测试5.0 mg/mL的BSA溶液蛋白浓度；
③将BSA溶液加入储液袋中,面积体积比为3 cm2/mL;
④条件为37±0.5℃的环境下分别放置5小时,1天,3天,1周；
⑤取出后,测试储液袋中BSA溶液的蛋白浓度
|实验结果
|实验结论
①LeKrius®膜蛋白吸附率极低,可忽略不计；
②液体接触层ULDPE业界化学惰性良好,蛋白吸附极低；
③吸附不会随时间延长而增加；
从实验数据可以看出,LeKrius®膜不管从细胞培养密度、细胞培养活率还是蛋白吸附率来看,都拥有优异的性能表现。
通过以上介绍及实验数据和结果,相信大家一定了解膜材的选择对于细胞培养会产生的影响如何。
作为中国较早一批专注于生物制药产业链上游一次性耗材、设备及解决方案的服务商,乐纯生物始终坚持以科研为导向,发展至今已形成SUS、过滤纯化及细胞培养三大产品体系。
针对配液与储液应用,除现有标准产品外,乐纯生物还可以根据客户不同的工艺应用场景,匹配定制不同用途的一次性工艺袋,如下图所示：
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