血清必须热灭活吗、对此BUNSEN带您了解相关疑问！

血清热灭活是许多细胞培养者探讨的话题,许多科研的小伙伴拿到一瓶全新的血清,总会犹豫血清究竟要不要进行灭活处理、血清灭活要怎样操作、在什么情况下要对血清进行灭活等等,关于这些疑问,BUNSEN本生技术小编今天就为大家做一个详细的解答。

一、什么是热灭活?

一般情况下,血清的热灭活是在血清全部解冻后,置于56℃水浴中30分钟进行处理。如果为了更好的保留血清的营养成分,减少热灭活对血清的损伤,可以将血清置于40℃水浴中20分钟进行热灭活。

二、血清为什么要热灭活?

很多人认为,血清热灭活是为了消灭血清中的细菌、病毒等微生物,其实不然,一瓶合格的血清,在生产过程中,会严格把控血清中微生物的指标。一般情况下,用户买到的血清,都是无菌的,可以在解冻后直接进行使用。

对血清进行热灭活处理,实际是为了使血清中的补体失活。补体是一种血清蛋白质,存在于人和脊椎动物血清及组织液中,不耐热,活化后具有酶活性、可介导免疫应答和炎症反应。可被抗原-抗体复合物或微生物所激活,导致病原微生物裂解或被吞噬。

三、胎牛血清需要灭活吗?

胎牛血清是来自未分娩的胎牛,经心脏穿刺采血,后经其他步骤制备而来的。这个阶段的血清中,未形成完整的补体系统,不会真正的干预免疫。胎牛血清中含有诸如生长因子、维生素、氨基酸等珍贵物质,将血清置于56℃水浴30分钟,会导致这些珍贵的营养物质流失,对血清造成不小的伤害,所以一般情况下,胎牛血清不需要热灭活处理。

四、什么情况下需要热灭活处理血清?

当实验涉及以下情况时,建议去除血清可能带来的补体系统的干扰：

1、诱导胚胎干细胞分化

2、免疫学研究

3、培养平滑肌细胞

4、其他补体参与的细胞培养过程

5、利用昆虫细胞研究病毒感染

因此,当涉及到一些对补体比较敏感的实验,并且血清中补体浓度相对比较高,可能存在对实验的影响时,需要考虑对血清进行热灭活。

五、血清热灭活为什么会产生大量沉淀?

1、血清灭活后出现的沉淀大多数是纤维蛋白析出,属正常现象。灭活过程中,多次摇晃血清,使血清受热均匀可以降低蛋白的析出。

2、当血清在未解冻状态时,直接置于56℃水浴,灭活过程中血清局部受热温度过高,加热时间过长就会产生胶状沉淀,这样的血清质量严重受损,是无法继续正常使用的。

总之,多数细胞培养中血清的热灭活并不是必要的。很多场合下,热灭活并不会改善细胞的生长,却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下,其促进的比率也是微不足道的。另外,血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染,从而给用户和供应商都带来不必要的麻烦。我们建议,对于那些对血清进行灭活的用户,需要通过试验来证实其必要性,确定灭活的适当条件;在灭活过程中,需要严格认真监测,并选择一个可重复的方案进行操作。

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