通常生化试剂盒可分为液体单试剂和液体双试剂,前者特别适用于半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪,使用方便,缺点是稳定性较差。与单试剂相比,双试剂提高了抗干扰能力,具有稳定性能较好,可消除样品自身空白等特点。此外还有多项同测组合试剂、浓缩试剂等。

对新的试剂盒,我们首先要查看其资质是否齐全,是否为合法有效试剂,是否有相关的临床试验验证等。其次,在本实验室,可做以下工作来进行验证是否适合使用。

一、试剂空白吸光度

用蒸馏水做空白,用zhi 定的空白液加入试剂作为样品测试,在测试主波长下,记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟后的吸光度(A2),A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值,应符合企业给定范围。这是判定试剂质量的一个有效指标。

二、试剂空白变化速率

对于速率法试剂盒,用zhi 定的空白液加入试剂作为样品测试时,在测试主波长下,记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2),计算试剂空白吸光度变化率(DA/min),应不超过企业给定值。测定试剂空白吸光度变化(ΔA/min),用来检查试剂在工作状态下的稳定性。但事实上,试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性,试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性。

三、分析灵敏度

用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/min)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变化,其含义类似摩尔消光系数,应符合企业给定范围。需要注意的是,分析灵敏度不是越高越好,以适合待测物检测范围为原则。分析灵敏度一般用于批间比较,较能反映商的配方、原料的一致性。

四、线性范围

取高浓度样品和低浓度样品按不同比例混合成5个浓度做线性试验。线性范围内的分析性能应符合如下要求：

①线性性相关系数r应≥0.990;

②线性偏差应不超过企业给定值。试剂(盒)的线性范围越宽,临床复测几率越小,但与样品/试剂比例成反比。

五、重复性

1.批内重复性 在重复性条件下,用高、中、低三个水平浓度(高、低浓度应超过参考区间20%～30%,中浓度水平在参考区间之内)的控制血清或新鲜人血清测试试剂,重复测试至少10次。

2.批间重复性 用质量控制血清测试3×3(3个批号,每个批号取3瓶)批间差,较能反映商的配方、原料的一致性。干粉或冻干试剂还需测定批内瓶间差,测定同一批号的试剂20瓶,用变异系数(CV)来表示。变异系数(CV)不超过企业给定值。

六、准确度

1.相对偏差 直接用试剂盒测定参考物质(平行3次),评价测定均值与靶值的偏离程度。也可用由参考方法定值的高、中、低三个浓度的人混合血清,用试剂盒平行测定3次,计算均值与定值的相对偏差。

2.比对试验 既无参考物质、参考血清,也无标准品,也可用比对试验来验证准确度。

七、校准品溯源、质控品赋值

1.校准品溯源性 根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容,明确溯源途径。

2.质控品赋值有效性 质控品的测定结果应在试剂盒规定的范围内。

八、稳定性

1.效期稳定性 取已到效期的试剂盒按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价。

2.热稳定性试验 生化试剂盒一般置2-8℃保存,为了快速有效地评价试剂盒的稳定性,可以用加速试验来估计。

3.开瓶稳定性 干粉试剂开瓶后(复溶后)在规定的储存条件下保存至预期时间内,产品的性能至少应符合线性和准确度的要求。