测量方法：
本法系用液相色谱法(通则0512)测定药材、饮片及制剂中的毒素(以毒素B1、毒素B2、毒素G1,毒素G2总量计),除另有规定外,按下列方法测定。
液相色谱仪器构成：
等度液相色谱仪(高压输液泵一台、荧光检测器一台、柱温箱一台、进样器1件、色谱柱一根等)
柱后衍生仪：PCS-i220A/B
色谱柱：PC C18 4.6×150mm,5μm
高速离心机：离心速度4000转/分钟以上
溶剂过滤器
超声波清洗器
固相萃取仪
免疫亲和柱
分析天平：万分之一
均质器(高速搅拌器)：搅拌速度大于11000转/分钟
试剂
甲醇：色谱纯
乙腈：色谱纯
0.05%的碘溶液
超纯水
毒素B1.毒素B2、毒素G1、毒素G2对照品
色谱条件
检测器：荧光检测器
色谱柱：PC C18 4.6×150mm,5μm
流动相：甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)
流速：1.0ml/min
柱温：40℃
衍生溶液：0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加入甲醇100ml使溶解,用水稀释至1000ml制成)
衍生化泵流速：0.2ml/min
衍生化温度:70℃
激发波长λex=360nm(或365nm),发射波长λem=450nm
混合对照品溶液的制备
精密量取毒素混合标准品(毒素B1、毒素B2、毒素G1、毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/m1)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得。
供试品溶液的制备
取供试品粉末约15g(过二号筛),精密称定,加入氯化钠3g,置于均质瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分钟),离心5分钟(离心速度4000转/分钟),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,量取续滤液20.0ml,通过免疫亲合柱,流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
测定方法
精密吸取上述混合对照品溶液20μl,注入液相色谱仪,测定峰面积。另精密吸取上述供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算出终结果。
毒素B1、B2、G1、G2对照品色谱图：
以上是使用PCS-i220A/B柱后衍生仪 结果基线平稳 峰型窄 检出限低 检测准确 *方法要求。
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