产品仅用于科学研究,非诊断试剂,不能用于临床诊断。 |
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试验原理:本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)
二、产品性能:
1)物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。
2) 剂量反应曲线线性
标准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.99。
3) 精密度
批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批内变异系数CV%小于8%。
批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于12%。
4) 特异性
本试剂盒识别天然和重组人白细胞介素6(IL-6)。
5) 稳定性
注意事项
2℃-8℃保存,有效期6个月。
三、样本收集:
细胞培养上清
2000 × g条件下离心20m分钟,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。
血清样本
离心管收集血清。血样凝集 30 分钟后,2000 × g 离心 10 分钟。吸取血清样本之后即刻检测,或者分装,-20℃以下贮存,避免反复冻融。
血浆样本
EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。2000 × g 离心 20 分钟收集样本。即刻检测, 或者分装,-20℃以下贮存,避免反复冻融。
组织样本
用预冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(般按1: 9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9 mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推 jian在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进步裂解组织细胞,可以对匀 浆液进行超声破碎或反复冻融。后将匀浆液5000×g离心 5-10分钟,取上清检测。
细胞提取液样本
贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞;悬浮 细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS 洗涤3次。每 1×106 个细胞中加入150-200μL PBS重悬并通过反 复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟,取上清检测。
注意:1)避免样本的反复冻融,在检测,冷冻样本应缓慢地恢复至室温,轻柔混匀。 2)本试剂盒可能适用于其它生物学样本,但是未充分验证。
四、产品功能:
1) 试剂、样本平衡:检测之请将所有的试剂、样本平衡至室温,标准品、质控品和样品,建议
做复孔。
配置工作液:按面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2) 加标准品、样本:设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,
样本孔加待测样本50μL,空白孔不加。
3) 加 HRP标记抗体:除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体
100μL。
4) 孵育:使用封板膜封板,37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。
5) 洗涤:弃掉液体,每孔加入300μL洗液洗板,静置20s,洗涤5次。每次洗板,在吸水纸上拍 干。为获得理想的实验性能,必须*移除残留液体。
6) 加底物显色:每孔加入50μL显色底物A、B 各50μL,37℃水浴锅或恒温箱温育15分钟。
7) 加终止液:每孔加入50μL终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化 明显不均匀,请轻轻叩击板框,充分混匀。
8) 检测读数:在 15分钟之内,使用450nm酶标仪进行检测读数。
常用型号五、试剂组成:
未开封试剂盒 | 贮存于 2 - 8℃。 请在有效期内使用。 |
打开的 | | |
试剂盒或重组试剂 | 显色底物A 显色底物B | 在 2 - 8℃, 大约可以贮存 3个月。 |
| 终止液 | |
| 20×洗液 | |
| 样本稀释液 | |
| 标准品 | |
| HRP 标记抗体 | 在 2 - 8℃,大约可贮存 14天。使用后丢弃。 |
| | 未使用的板条请放回铝箔袋,封好封 |
| 预包被酶标板 | 口。在 2 - 8℃,大约可贮存 1 4天。 |