活化 Rac1 Pull-Down 和检测试剂盒

Thermo Scientific 活化 Rac1 沉降和检测试剂盒是一种全套试剂盒,能够通过与 Pak1 蛋白结合结构域的特异性蛋白相互作用选择性地富集和检测 GTP 结合 Rac1 GTPase。

活化 Rac1 沉降和检测试剂盒包含纯化的 GST-Pak1 蛋白结合结构域 (PBD)、琼脂糖树脂、阳性和阴性对照品（分别为 GTPγS 和 GDP）、裂解/结合/洗涤缓冲液、抗 Rac1 一抗、SDS 样品缓冲液、离心柱和收集管。该试剂盒使用 NIH3T3 细胞的裂解物进行验证,已知该细胞系具有稳健的 Rac1 活性。

活化 Rac1 沉降和检测试剂盒的特点：

• 高灵敏度和精确度—优化试剂、特异性抗 Rac1 抗体和 Western 印迹程序可确保精确控制和半定量结果
• 经验证—对 Rac1 检测进行功能检测,以确保质量和性能
• 兼容—对小鼠、大鼠和人来源的多种细胞类型有效

应用：
• 追踪细胞分化、迁移、分裂和细胞骨架重排期间的 Rac1 GTPase 活化
• 研究 Rac1 依赖性板状伪足形成
• 研究活化 Rac1 在癌症和血管新生中的作用
• 监测使用生长因子刺激后的 Rac1 活性
• 筛查小分子抑制剂对 Rac1 活性的影响

使用经用于活化内源性 Rac1 的 GTPγS 处理的细胞裂解物相对于经灭活小 GTPase 的 GDP 处理的裂解物,验证了活化 Rac1 沉降和检测试剂盒的活化 Rac1 富集方法的功能和特异性。GTPγS 处理捕获 GTP 结合活化形式的 Rac1,在存在内源性 Rac1 时产生强烈信号。GDP 处理使 Rac1 进入 GDP 结合的非活化状态,无论 Rac1 蛋白水平如何均几乎不产生信号。对该试剂盒进行了优化,用于使用 HRP 结合型二抗（山羊抗小鼠 IgG,产品编号 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化学发光底物（产品编号 34080）进行 Western 印迹检测。试剂盒所含成分均足够进行 30 次沉降实验。

Rac1 背景：
Rho 家族 GTPase 具有许多细胞功能,包括细胞信号传导、转录调节和肌动蛋白细胞骨架的组织。该 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。这些 GTPase 通过 GPCR、激酶、细胞因子和黏附受体实现从质膜到细胞溶质的信号转导。通过蛋白羧基末端的香叶酰香叶酰脂质修饰来实现与质膜的黏附。Rac1 活化导致肌动蛋白聚合,并在细胞外围表现为膜皱缩。Rac1 活化也会导致板状伪足形成。

Rac1 GTPase 通过激酶、黏附分子或细胞因子/趋化因子受体在经生长因子（EGF、胰岛素、PDGF、NGF）、整合素（纤连蛋白）或化学引诱物 (fMLP) 刺激后转导信号。例如,EGF 刺激导致 PI3 激酶活化,导致细胞生长和细胞外围重组（膜皱缩）。或者,通过 Rac1 的受体激酶信号转导导致 MAPK 应激反应通路 SAPK (JNK) 和 p38 活化。用纤连蛋白刺激细胞导致整合素介导的细胞伸展。Rac1 的两个主效应蛋白是 Pak1 和磷酸肌醇 4-磷酸盐 5-激酶。Pak1 (p65 Pak) 是一种激活 JNK 通路的激酶,而磷酸肌醇 4-磷酸盐 5-激酶促进肌动蛋白丝组装。Rac 对 T 细胞发育和促进分化细胞至关重要。然而,GTPase 的 Rho 家族可在细胞信号转导期间发挥激动作用以及在分化期间发挥拮抗作用。

更多产品数据
•通过特异性下游效应子测定小 GTPase 的激活
•在神经元细胞分化过程中检测和定位活性 GTPase