一、实验目的

本研究利用固相萃取作为样品前处理方法,HPLC作为分析方法,检测牛奶样品中的残留水平。该方法操作简便,可简化样品前处理过程,减少有机溶剂的使用。

二、实验目标物

（CAS: 73231-34-2）。

三、应用范围

本方法适用于牛奶中的检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma®Copure® HLB 固相萃取柱 60mg/3mL(Cat.No.COHLB360)。

五、实验步骤

1、样品提取

准确称取牛奶2 g（精确到0.001 g）,加入乙酸乙酯15 mL,高速均质1 min,加入5 g,涡旋振荡1min,摇床振荡10 min。4000 r/min转速离心5 min。将上清液转移至梨形瓶中,于45 ℃旋蒸至近干,用6mL水溶解残渣,5 mL×2次正己烷除脂,弃去正己烷层,取3  mL水层待净化。

2、SPE柱净化

(1) 活化：HLB 固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2) 上样和洗脱：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中,以2 mL/min的流速过柱,弃去滤液,用5 mL水淋洗固相萃取柱,弃去淋洗液,抽干5 min。用5 mL 5%氨化甲醇洗脱固相萃取柱,收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液于45 ℃氮吹吹干,用1 mL甲醇定容,0.22 μm微孔滤膜过滤,供HPLC上机测试。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm,  5μm )
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：224 nm
流动相：A：水     B：乙腈
洗脱方式：等度洗脱
表1  流动相等度洗脱条件

流速：1 mL/min
进样体积：20μL

六、实验结果

1、牛奶中的5 mg/kg添加回收结果
表2牛奶中的5  mg/kg添加回收结果

2、添加水平为5 mg/kg牛奶中残留物色谱图

图1  添加水平为5  mg/kg牛奶中残留物色谱图