一、实验目的

本研究针对猪肉中多种兽药残留同时检测的目的,开发了经过优化的固相萃取前处理方法和HPLC分析方法。待测物质为主要的抗生素兽药种类中具有代表性的化合物,包括磺胺类、四环素类、喹诺酮类、类。

二、实验目标物

麻保沙星  (CAS:115550-35-1),双氟沙星（CAS:98106-17-3）,（CAS:79-57-2）,（CAS:73231-34-2）,（CAS:2447-57-6）,（CAS:155-91-9）,（CAS:56-75-7）。

三、应用范围

本方法适用于猪肉中多种兽药残留的检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma®Copure® HLB 固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360)。

五、实验步骤

1、样品提取

准确称取猪肉3 g于50 mL离心管中,加入0.1 mol/L的EDTA-Mcllvaine溶液15 mL,漩涡摇匀1 min,冰水浴超声10 min,控制样品温度<15 ℃；5000 r/min离心8 min。取上清液,重复提取一次,合并清液、快速滤纸过滤,备用。

2、SPE柱净化

(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化 。
(2)上样和洗脱：在HLB固相萃取柱上加入10 mL备用样液,弃去流出液,用3 mL 5%甲醇水溶液（v/v）淋洗,弃去淋洗液,抽干小柱；用8 mL甲醇-乙酸乙酯溶液（1:9,v/v）洗脱,收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速2 mL/min） 。
(3)重新溶解：洗脱液40 ℃氮吹吹干,1 mL甲醇定容,过0.45 μm 滤膜,上机测试。

3、HPLC条件

设  备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5 μm )
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相 ：A：乙腈  B： 0.1%甲酸水溶液（v/v）
洗脱方式：梯度洗脱
表1  梯度洗脱条件

流速：1.0 mL/min
检测波长：270 nm
进样体积:  20 μL

六、实验结果

1、4 mg/kg猪肉中多种兽药的添加回收结果
表2 4 mg/kg猪肉中多种兽药的添加回收结果

2、添加水平为4 mg/kg猪肉中多种兽药检测的液相色谱图

图1 添加水平为4 mg/kg猪肉中多种兽药检测的液相色谱图