一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法,HPLC法作为分析方法,检测食品中苯甲酸含量。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。

二、实验目标物

苯甲酸 (CAS:65-85-0) 。

三、应用范围

本方法适用于食品中苯甲酸的检测的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法》。

五、实验材料

biocomma®Copure® MAX 固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMAX360)。

六、实验步骤

1、样品提取

准确称取牛奶10 g于50 mL离心管中,加入0.25 mol/L的溶液2 mL,摇匀,再加入1 mol/L的乙酸锌溶液2 mL,摇匀,4000 r/min离心10 min。上清液待净化。

2、SPE柱净化

(1) 活化：MAX 固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化。
(2) 上样和洗脱：在MAX固相萃取柱上加入5 mL备用样液,弃去流出液。用3 mL 2%氨水水溶液（v/v）、3mL甲醇淋洗,弃去淋洗液；抽干小柱；用2 mL 5%甲酸甲醇溶液（v/v）洗脱,收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速1 mL/min）。
(3) 重新溶解：洗脱液过0.45 μm滤膜,上机测试。

3、HPLC条件

设  备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相 ：A：乙腈
B：磷酸盐缓冲溶液（称取磷酸二氢钾  2.5g+
2.5g,加水溶解定容到1000mL）
洗脱方式：等度洗脱A:B=10:90
流速：1.0 mL/min
检测波长：230 nm
进样体积:  20 μL

七、实验结果

1、25 mg/kg牛奶中苯甲酸的添加回收结果
表1  牛奶中苯甲酸25  mg/kg添加回收结果

2、添加水平为25 mg/kg牛奶中苯甲酸检测的液相色谱图

图1  添加水平为25  mg/kg牛奶中苯甲酸检测的液相色谱图