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小鼠Toll样受体4(TLR4)ELISA试剂盒BS-2816 天津本生 人ELISA试剂盒 ELISA检测试剂盒 酶联免疫试剂盒

本生生物公司供应：ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器,分光光度计。

本试剂盒仅供研究使用

检测范围： 96T

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中小鼠Toll样受体4(TLR4)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中Toll样受体4(TLR4)水平。用纯化的Toll样受体4(TLR4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Toll样受体4(TLR4),再与HRP 标记的Toll样受体4(TLR4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的Toll样受体4(TLR4)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠Toll样受体4(TLR4)浓度。

试剂盒组成：

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 !2 酶标试剂 6ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 !4 样品稀释液 6ml×1 瓶

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 !6 显色剂B 液 6ml×1/瓶

7 终止液 6ml×1 瓶!8 标准品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶!10 说明书 1 份

11 封板膜 2 张!12 密封袋 1 个

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)活性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

60 ng/L5 号标准品150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

30 ng/L4 号标准品150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

15 ng/L3 号标准品150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

7.5 ng/L2 号标准品150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

3.75 ng/L1 号标准品150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,

然后再加待测样品 10µl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 后弃去,如此重复 5 次,拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10.终止：每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定：以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

小鼠Toll样受体4(TLR4)ELISA试剂盒BS-2816  天津本生

操作程序总结：

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存：;2-8℃。

2.有效期：6 个月