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上海仁邦医药科技有限公司 主营产品：修饰性PEG聚乙二醇,荧光染料,抗体,标准品,医药中间体,化工原料,食品行业检测试剂盒及糖标品,ELISA试剂盒,whatman滤膜滤纸,实验室仪器耗材。 |
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上海仁邦医药科技有限公司 主营产品：修饰性PEG聚乙二醇,荧光染料,抗体,标准品,医药中间体,化工原料,食品行业检测试剂盒及糖标品,ELISA试剂盒,whatman滤膜滤纸,实验室仪器耗材。 |
2017-5-8 阅读(3815)
爱尔兰Megazyme膳食纤维总量检测
在生命科学领域,上海仁邦医药为业界提供了丰富的实验室和生物医药生产研发的产品。庆祝上海仁邦医药正式成为膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit的 代理商,在这里要感谢广大客户多年来对上海仁邦医药科技有限公司的支持和厚爱,我们将一如既往的为广大客户带来膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit高品质的产品和服务,欢迎广大新老客户。
膳食纤维总量检测试剂盒 Total Dietary Fibre Assay Kit
规格：200 assays per kit
库存状态：现货
膳食纤维是一种多糖,它既不能被消化吸收,也不能产生能量。因此,曾一度被认为是一种"无营养物质"。后来发现了膳食纤维具有相当重要的作用。并被营养学界补充认定为第七类营养素,和传统的六类营养素——蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质与水并列。
1.可溶性膳食纤维（来源于果胶、藻胶、魔芋等。魔芋盛产于我国四川等地,主要成分为葡甘聚糖）
2.不可溶性膳食纤维（全谷类粮食,其中包括麦麸、麦片、全麦粉及糙米、燕麦全谷类食物、豆类、蔬菜和水果等。）
膳食纤维是指碳水化合物及其相类似物质的总和,包括多糖、寡糖、木质素以及相关的植物物质。主要有纤维素、半纤维素、果胶及亲水胶体物质,如树胶、海藻多糖等组分；另外还包括植物细胞壁中所含有的木质素；不被人体消化酶所分解的物质,如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纤维素、黏质、寡糖以及少量相关成分,如蜡纸、角质、软木脂等。
总膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43,AOAC 985.29,AACC32-07和AACC 32-05方法开发的,也适用于其它方法,如AACC Method 32-21,AACC method32-06。
脱脂（如大于10%）干燥后的样品经热稳定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化,酶解液通过乙醇沉淀、过滤,乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重,得到总膳食纤维（TDF）残渣；
酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣,干燥后称重,得到不溶性膳食纤维（IDF）残渣；
滤液用乙醇沉淀,过滤、干燥、称重,得到可溶性膳食纤维（SDF）残渣。
TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。
该检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶,酶的活力是标准化的,而标准化的a-淀粉酶的活力在测量抗性淀粉是*的。
淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶,而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物,这将导致溶解和低估β-葡聚糖。
该试剂盒提供的酶都是稳定的液体,可以保存到试剂盒有效期,并且是直接应用液,不需要使用前再溶解。
适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维（TDF）、不溶性
膳食纤维（IDF）和可溶性膳食纤维（SDF）的检测。
每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验,如另外需要可单独订货：
Bottle 1 ,1瓶：
热稳定a-淀粉酶（20mL,~ 3,000 U/mL,Ceralpha method；~ 10,000 U/mL on
soluble starch。).
Bottle 2,1瓶：
纯化的蛋白酶(20mL,50 mg/mL!~ 350 tyrosine Units/mL。)
Bottle 3,2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL,3300 U/mL on soluble starch。)
总计：80ml（4瓶20ml包装）
另外,实验中需要用到硅藻土需要单独购买。
其他相关试剂盒：
膳食纤维质控试剂盒（货号：K-TSCK）
质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度,含下表中所列物质每种一瓶,并附有技术数据单(K-TSCK),盒中每种物质足够10次测试用。
| 品种 | 数量 |
| β-葡聚糖（大麦） | 1.0g |
| 高直链玉米淀粉 | 10.0g |
| 淀粉（小麦） | 10.0g |
| 酪蛋白 | 5.0g |
| 果胶 | 1.0g |
5.1 设备
5.2 试剂
(TRIS) (Sigma,T1503),用1.7L蒸馏水溶解,用6mol/L氢氧化钠调节PH至
8.2±0.1,加水稀释到2L（注意24℃时PH值为8.2,20℃时PH值为8.3,27-28℃
时PH值为8.1）
后用水定容到1L。
6.1 根据AACC/AOAC的膳食纤维检测方法,必须确保酶的纯度。
6.1.1 淀粉葡萄糖苷酶被木聚糖酶、纤维素酶和果胶酶污染,会低估β-葡聚糖、
阿拉伯木聚糖和果胶的含量。
6.1.2 热稳定a-淀粉酶被污染,会影响抗性淀粉的测量。
6.1.3 蛋白酶被4-β-葡聚糖酶污染,会低估β-葡聚糖的含量。
6.1.4 如不是使用该酶,请参考下面方法测定。
| Test Sample | Activity Tested | Sample Wt（g） | Expected Recovery (%) |
| Citrus pectin | Pectinasea 『1』 | 0.1 | 90-95 『3』 |
| ß-Glucan (barley) | ß-glucanase (cellulase) 『1』 | 0.1 | 95-100 |
| Wheat starch | Amylase 『2』 | 1.0 | 0-1 |
| Casein | Protease 『2』 | 0.3 | 0-2 |
| High amylose starch | Amylase | 1.0 | ~30 『4』 |
注解：
『1』：没有酶活力作用。
『2』：zui大酶活力作用
『3』：除很少量的柑橘果胶全部沉淀
『4』：含有大量抗性淀粉,准确回收率的数值影响热稳定a-淀粉酶的使用量。
6.2 根据AACC/AOAC的膳食纤维检测方法,必须对酶标准化测定,如果不是使用该的酶,请按以下方法测定
6.2.1 淀粉葡萄糖苷酶,0.2 mL,
— 酶活力表示方法1：淀粉/葡萄糖酶-过氧化物酶法,3300 U/mL,1个酶活力单位定义为：40°C,PH值4.5时,每分钟释放1 μmol葡萄糖所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2：对-硝基苯基-b-麦芽糖苷（PNPBM)法,200 U/mL, 1个酶活力单位（1PNP单位））定义为：40°C,有过量萄糖苷酶存在下,每分钟从对硝基苯基-β-麦芽糖苷释放1 μmol 对硝基苯基所需要的酶量。
6.2.2 热稳定a-淀粉酶,0.05 mL,
— 酶活力表示方法1：以淀粉为底物,以Nelson/Somogyi还原糖表示,10000U/mL ,1个酶活力单位定义为：40°C,PH值6.5时,每分钟释放1 μmol葡萄糖所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2：对硝基苯基麦芽糖为底物,3,000 U/mL（Ceralpha）,1个酶活力单位定义为：40°C,PH值6.5时,每分钟释放1 μmol对-硝基苯基所需要的酶量。
6.2.3 蛋白酶,0.10 mL
— 酶活力表示方法1：酪蛋白测试,350 U/mL或50 mg/mL或7 Tyrosine U/mL,1个酶活力单位定义为：40°C,PH值8.0时,每分钟从可溶性酪蛋白中水解出（并溶于三氯）1 μmol酪氨酸所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2：偶氮酪蛋白测试,350 U/mL或50 mg/mL或7 Tyrosine U/mL,1个内肽酶活力单位定义为：40°C,PH值8.0时,每分钟从可溶性酪蛋白中水解出（并溶于三氯）1μmol酪氨酸所需要的酶量。该偶氮酪蛋白(货号：S-AZCAS).
7.1 试样制备
准确称取双份试样各1 g,质量差小于0.005g,到0.1mg,置于400mL或600mL高型烧杯中,同时制备双份空白样,在每个烧杯中加入40 mL PH值8.2的MES-TRIS缓冲液,磁力搅拌,直到试样*分散到缓冲液中。
7.2 热稳定a-淀粉酶酶解：加入50 μL热稳定a-淀粉酶溶液,加盖铝箔,置于95-100°C恒温振荡水浴中持续振摇,当所有烧杯全部放入水浴开始计时,反应35分钟。
7.3 冷却：将烧杯取出玲却到60°C,除去铝箔盖,用刮勺将烧杯内壁和底部的胶状物刮下,用10 mL蒸馏水冲洗烧杯壁和刮勺。
7.4 蛋白酶酶解：在每个烧杯中各加入100 μL蛋白酶溶液,加盖铝箔,置于60°C恒振荡水浴中,当烧杯内温度达到60°C开始计时,持续反应30分钟。
7.5 PH值调节：反应30分钟后,边搅拌边加入0.561 mol/L盐酸,严格控制60°C,用 1mol/L氢氧化钠溶液或 1mol/L盐酸溶液,控制PH值在4.5±0.2。
7.6 淀粉葡萄糖苷酶酶解：在上述溶液中边搅拌边加入200 μL淀粉葡萄糖苷酶溶液,加盖铝箔,置于60°C恒温振荡水浴中,持续振摇,当烧杯内温度达到60°C开始计时,反应30分钟。
8.1不溶性膳食纤维测定：
8.1.1 过滤洗涤：试样酶解液全部转移到坩埚中过滤,残渣用10mL预热到70°C的蒸馏水洗涤两次,合并过滤液,转移至另一600mL高脚烧杯中,备测可溶性膳食纤维。残渣分别用10mL 95%乙醇和丙酮洗涤两次,抽滤去除洗涤液,将坩埚连同残渣在103°C烘干过夜,将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重（包括坩埚、膳食纤维残渣和硅藻土）,至0.1mg,减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
8.1.2 蛋白质和灰分测定：称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定氮法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质质量。另一份在525°C灰化5小时,于干燥器中冷却,称量坩埚总量（至0.1mg）减去坩埚和硅藻土干重,计算灰分质量。
8.2 可溶性膳食纤维测定
8.2.1 计算滤液体积：将不可溶性膳食纤维过滤后的滤液收集到600mL的高型烧杯中,通过烧杯+滤液总重扣除烧杯质量的方法估算滤液的体积。
8.2.2 沉淀：将滤液加入4倍体积预热60°C的95%乙醇,或取80g滤液加入320mL预热60°C的95%乙醇室温下沉淀1小时。
8.2.3 过滤：在干燥的坩埚中加入1g硅藻土,70°C真空干燥至恒重,记录坩埚的质量（到0.1mg）。用15mL 78%乙醇将硅藻土润湿,并用真空溶剂过滤装置在抽真空条件下,使硅藻土平铺于坩埚中。将样品酶解液缓慢转移至对应的坩埚中,抽滤。用刮勺和78%乙醇将所有残渣转至坩埚中。
8.2.4 洗涤：分别用15mL 78%乙醇、15mL 95%乙醇和15mL丙酮洗涤残渣各两次,抽滤去除洗涤液后,将坩埚连同残渣在105°C烘干过夜。将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重（包括坩埚、膳食纤维残渣和硅藻土）,至0.1mg。减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
8.2.5 蛋白质和灰分测定：称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定氮法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质质量,另一份在525°C灰化5小时,于干燥器中冷却,称量坩埚总量（至0.1mg）减去坩埚和硅藻土干重,计算灰分质量。
8.3总膳食纤维检测检测
8.3.1 沉淀：在每份试样中加入预热至60°C的95%乙醇225mL（预热后的体积,如乙醇的温度超过65°C,则加入228mL）,乙醇与样液体积比为4：1,取出烧杯,盖上铝箔,室温下沉淀1小时。建议改为：称量酶解液的质量,用天平加入4倍质量的预热的60°C的95%乙醇,4°C冰箱中沉淀过夜。
8.3.2 过滤：在干燥的坩埚中加入1g硅藻土,70°C真空干燥至恒重,记录坩埚的质量（到0.1mg）。用15mL 78%乙醇将硅藻土润湿,并用真空溶剂过滤装置在抽真空条件下,使硅藻土平铺于坩埚中。将样品酶解液缓慢转移至对应的坩埚中,抽滤。用刮勺和78%乙醇将所有残渣转至坩埚中。
8.3.3 洗涤：分别用15mL 78%乙醇、15mL 95%乙醇和15mL丙酮洗涤残渣各两次,抽滤去除洗涤液后,将坩埚连同残渣在105°C烘干过夜。将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重（包括坩埚、膳食纤维残渣和硅藻土）,至0.1mg。减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
8.3.4 蛋白质和灰分测定：称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定氮
法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质质量。,另一份在525°C灰化5小时,
于干燥器中冷却,称量坩埚总量（至0.1mg）减去坩埚和硅藻土
干重,计算灰分质量。
DF（%）=『（R1+R2）/2-p-A-B』/『（M1+M2）/2』*100%
式中：
DF=样品中膳食纤维含量（TDF、IDF、SDF）,%
R1 和R2=双份样品残渣的质量,单位为毫克（mg）
m1 和m2=双份样品的质量,单位为毫克（mg）
A=灰分的质量,
P=蛋白的质量
B=空白=(BR1+BR2）/2-BP-BA
BR1 和BR2=双份试样空白残渣的质量
BP=试样空白蛋白的质量
BA=试样空白灰分的质量
可以使用该的计算软件Mega-CalcTM进行自动计算。
方法二
根据AACC method 32-05 和AOAC Method 985.29方法测定
b．10±0.5 mL 78 %乙醇
溶解在700mL蒸馏水中,用水定容到1L,用PH计检查PH值。
移到容量瓶中,用水定容到1L。
到1L。
总膳食纤维的测定必须是低脂或无脂的干燥样品,取混匀后的样品于70°C真
空干燥过夜,干燥器中冷却,再称重记录重量损失,干样粉碎后过0.3-0.5 mm
筛,若试样不能加热,则冷冻干燥后再粉碎过筛。如果是高脂肪样品(> 10 %),
取经过干燥的样品分别用25mL石油醚脱脂三次,干燥后记录脱脂的质量损失,
zui后计算总膳食纤维含量时进行进行校正,粉碎过筛后的干燥试样放在干燥
器中待用。
准确称取双份试样各1 g,质量差小于0.005g,到0.1mg,置于400mL或
600mL高型烧杯中,同时制备双份空白样,在每个烧杯中加入50 mL PH值6.0
的磷酸盐缓冲液,磁力搅拌,直到试样*分散到缓冲液中,控制PH值6.0±0.1。
4.2 热稳定a-淀粉酶酶解：加入50 μL热稳定a-淀粉酶溶液,加盖铝箔,置于沸腾
水浴中15分钟,每5分钟轻轻振荡一次。当烧杯内的温度到100°C开始计时,
总共大约30分钟。
4.3 冷却：将烧杯取出冷却到室温,加入10 mL 0.275mol/L 的氢氧化钠,调节
PH值在7.5±0.1。
4.4 蛋白酶酶解：在每个烧杯中各加入100 μL蛋白酶溶液,加盖铝箔,置于60°C
恒振荡水浴中,当烧杯温度达到60°C开始计时,持续反应30分钟。
4.5 冷却：加入10 mL 0.325 mol/L盐酸,调节PH值在4.5±0.2。
4.6 淀粉葡萄糖苷酶酶解：在上述溶液中边搅拌边加入200 μL淀粉葡萄糖苷酶溶
液,加盖铝箔,置于60°C恒温振荡水浴中,持续振摇,当烧杯内温度达到60°C
开始计时,反应20分钟。
4.7 在每份试样中加入预热至60°C的95%乙醇280mL（预热前的体积）,乙醇与样
液体积比为4：1,取出烧杯,盖上铝箔,室温下沉淀1小时。
4.8 过滤：在干燥的坩埚中加入1g硅藻土,70°C真空干燥至恒重,记录坩埚的质
量（到0.1mg）。用15mL 78%乙醇将硅藻土润湿,并用真空溶剂过滤装置
在抽真空条件下,使硅藻土平铺于坩埚中。将样品酶解液缓慢转移至对应的
坩埚中,抽滤。用刮勺和78%乙醇将所有残渣转至坩埚中。
4.9 洗涤：分别用20mL 78%乙醇洗涤3次、10mL 95%乙醇和10mL丙酮洗涤残渣
各两次,抽滤去除洗涤液后,将坩埚连同残渣在105°C烘干过夜或70°C真空
干燥过夜。将坩埚置于干燥器中冷却1小时,称重（包括坩埚、膳食纤维残渣
和硅藻土）,至0.1mg。减去坩埚和硅藻土的干重,计算残渣质量。
4.10 蛋白质和灰分测定：称完质量的残渣和硅藻土的混合物,一份用凯氏定
氮法,以N×6.25为换算系数,计算蛋白质含量。另一份在525°C灰化5小时,
于干燥器中冷却,称量坩埚总量（至0.1mg）减去坩埚和硅藻土干重,
计算灰分质量。
计算：
未校正的平均空白残渣 (UABR)=平均试样空白残渣质量,单位为毫克
未校正空白蛋白残渣(BPR)=UABR x %空白蛋白/100
未校正空白灰分残渣(BAR)=UABR x %空白灰分/100
校正的空白(CB)= UABR – BPR – BAR
未校正的平均样品残渣 (USAR)=平均试样空白残渣质量,单位为毫克
未校正样品蛋白残渣(SPR)=UABR x %空白蛋白/100
未校正样品灰分残渣(SAR)=UABR x %空白灰分/100
校正的样品(CSR)= USAR-SPR-SAR-CB% TDF= 100 x CSR/样品质量mgzui终的% TDF是去除了和水分后的总膳食纤维含量。
10、参考文献：
foods and food products.J.Assoc.Off.Anal.Chem., 71:1017.16
Total Dietary Fiber Assay Kit
The Total Dietary Fiber test kit is suitable is suitable for the measurement and analysis of Total Dietary Fiber.
For the determination of Total Dietary Fiber in cereal products,
foodstuffs, feeds and other materialsPrinciple:
(α-amylase + amyloglucosidase)
(1) Starch + H2O → D-glucose(protease)
(2) Protein + H2O → peptides(3) Dietary fiber determined gravimetrically following alcohol
precipitation
(4) Ash and residual protein determined on DF residues
and subtracted
Kit size:100 / 200 assays
Method:Hydrolysis / removal of non-dietary
fibre components
Total assay time:~ 100 min
Detection limit:0.5-100% of sample weight
Application examples:
Food ingredients, food products and other materials
Method recognition:
AOAC (Methods 985.29, 991.42, 991.43 and 993.19), AACC
(Methods 32-05.01, 32-06.01, 32-07.01 and 32-21.01) and
CODEX (Type I Method)
Total Dietary Fiber Assay Kit, for the measurement and analysis of total, soluble and insoluble dietary fiber according to AOAC and AACC approved methods.See General Referee Reports: Journal of AOAC INTERNATIONAL, Vol.81, No.1, 1998.
Fiber is a mixture of complex organic substances, including hydrophilic compounds, such as soluble and insoluble polysaccharides and non-digestable oligosaccharides, as well as a range of non-swellable, more or less hydrophobic, compounds such as cutins, suberins and lignins.The procedures for the determination and analysis of total dietary fiber as outlined in our booklet are based on the methods of Leeet al.1and Proskyet al.2,3(AOAC 991.43, AOAC 985.29, AACC 32-07.01 and AACC 32-05.01).However, the enzymes in the Megazyme Total Dietary Fiber Kit can also be used in other dietary fiber analytical methods such as AACC Method 32-21.01 and AACC Method 32-06.01.
1.Association of Official Analytical Chemists.(1985).Official Methods of Analysis, 14th ed., 1st suppl.Secs.43, A14-43, A20, p.399.
2.Association of Official Analytical Chemists.(1986).Changes in methods.J.Assoc.Off.Anal.Chem., 69, 370.
3.Association of Official Analytical Chemists.(1987).Changes in methods.J.Assoc.Off.Anal.Chem., 70, 393.
Two separate methods are described in the associated data booklet:
METHOD 1:
DETERMINATION OF TOTAL, SOLUBLE AND INSOLUBLE DIETARY FIBER
Based on AOAC Method 991.43 "Total, Soluble, and Insoluble Dietary Fiber in Foods" (First Action 1991) and AACC Method 32-07.01 "Determination of Soluble, Insoluble, and Total Dietary Fiber in Foods and Food Products" (Final Approval 10-16-91).
METHOD 2:
DETERMINATION OF TOTAL DIETARY FIBER
Based on AACC method 32-05.01 and AOAC Method 985.29.
Advantages
