氯霉素检测试剂盒使用说明书-齐一生物试剂盒
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氯霉素检测试剂盒
使用说明书
（酶联免疫法）
1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法检测水产组织、畜禽组
织、肝脏、蛋类、蜂蜜、牛奶、饲料及水等样本中的氯霉素药
物（Chloramphenicol,CAP） ,试剂盒由预包被偶联抗原的酶
标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检
测时,加入标准品或样本溶液,样本中的氯霉素药物和酶标板
上预包被偶联抗原竞争抗氯霉素药物抗体,加入酶标记物后,
用 TMB底物显色,样本吸光度值与其所含氯霉素药物含量成负
相关,与标准曲线比较即可得出样本中氯霉素药物的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：0.025ppb(ng/ml)
2.2 反应模式：25℃,30min～30min～15min
2.3 检测下限：
组织、肝脏、蜂蜜、牛奶……………0.0125ppb
蛋类、水样……………………………0.05ppb
尿液、血清、肠衣、饲料、奶粉……0.025ppb
2.4 交叉反应率：
氯霉素 …………………………………100%
甲砜霉素、氟甲砜霉素………………＜0.1%
2.5 样本回收率：
组织、肝脏……………………………85%±20%
蜂蜜、肠衣……………………………85%±25%
牛奶、饲料……………………………75%±25%
尿液、血清……………………………70%±20%
水样……………………………………90%±20%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96 孔
标准液：各 1ml
0ppb、 0.025ppb、 0.075ppb、 0.225ppb、 0.675ppb、 2.025ppb
高标准液（红盖） ：100ppb………1ml
酶标记物（红盖）…………………11ml
抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml
底物液 A（白盖）……………………6ml
底物液 B（黑盖）……………………6ml
终止液（黄盖）………………………6ml
20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml
2X 复溶液（黄盖）…………………50ml
说明书………………………………1 份
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡
器、离心机、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
4.2 微量移液器： 单道 20µl-200µl, 100µl-1000µl、 多道 300µl
4.3 试剂：乙酸乙酯、正己烷、乙腈、醋酸钠、醋酸
、亚硝基铁qing化钾（K2Fe(CN)5(NO)?2H2O） 、葡萄糖苷酸酶、硫
酸锌（ZnSO4·7H2O）
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知：
实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实
验结果。
5.2 配液：
配液 1：0.36M 亚硝基铁qing化钾溶液（牛奶、奶粉样本）
11.9g 亚硝基铁qing化钾加去离子水至 100ml 溶解。
配液 2：1.04M 硫酸锌溶液（牛奶、奶粉样本）
29.8g 硫酸锌加去离子水至 100ml 溶解。
配液 3：0.1M pH4.8 醋酸钠缓冲液（尿液样本）
2.4g 醋酸钠加去离子水 500ml 溶解,加 1.2ml 醋酸混匀。
配液 4：乙腈-水溶液
V 乙腈:V 水=84:16
配液 5：复溶液（若检测样本为水样,请勿稀释,直接使用）
将 2×复溶液用去离子水 2 倍稀释,用于样本的复溶,复
溶液在 4℃环境可保存一个月。
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 组织、鱼、虾、肝脏样本处理方法
1）称取均质后的样本 3±0.05g 于 50ml 离心管中,先加入3ml
去离子水振荡混匀, 再加入6ml乙酸乙酯振荡2分钟, 室温4000
转/分离心 10分钟；
2）取上层液体 2ml在 50-60℃下氮气吹干；
3）用 1ml 正己烷溶解干燥的残渣,再加入 0.5ml 复溶液,混
合 30 秒,室温 4000 转/分离心 5 分钟；
4）去除上层有机相,取下层水相 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：0.5 检测下限：0.0125ppb
5.3.2 血清、血浆样本处理方法
1）取 1ml血清或血浆至离心管中,加入 2ml 乙酸乙酯振荡 1
分钟,室温 4000转/分离心 5 分钟,或静置使水相与有机相分
离；
2）取全部上层液体在 50-60℃下氮气吹干；
3）用 1ml 正己烷溶解干燥的残渣,再加入 1ml 复溶液,混合
30 秒,室温 4000 转/分离心 5 分钟；
4）去除上层有机相,取下层水相 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：1 检测下限：0.025ppb
5.3.3 尿液样本处理方法
1） 取2ml尿液至离心管中, 加入0.1M pH4.8醋酸钠缓冲液0.5ml
混合,加40ul 葡萄糖苷酸酶,混匀,37℃水解 2 小时以上

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过夜） ；
2）将上述溶液恢复至室温后加入 8ml 乙酸乙酯振荡 1 分钟,
室温 4000 转/分离心 10 分钟, 取4ml 上层液体在 50-60℃下氮
气吹干；
3）用 1ml 复溶液溶解干燥的残渣,混匀；
4）取 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：1 检测下限：0.025ppb
5.3.4 蜂蜜样本处理方法
1）取 2±0.05g 蜂蜜于离心管中,用 4ml去离子水溶解,加入
4ml 乙酸乙酯振荡 2 分钟,室温 4000转/分离心10 分钟；
2）取上层液体 2ml 在 50-60℃下氮气吹干；
3）用 0.5ml 复溶液溶解干燥的残渣,混匀；
4）取 50μl 进行分析。
氯霉素检测试剂盒使用说明书-齐一生物试剂盒样本稀释倍数：0.5 检测下限：0.0125ppb
（检测下限 0.0125ppb,定量下限 0.05ppb,因某些样本
有干扰建议以 0.05ppb 作为阳性判定值）
5.3.5 肠衣样本处理方法
1）肠衣经清洗后均质,称取均质后的样本 1±0.05g 于 50ml
离心管中,加入 10ml乙酸乙酯振荡 2 分钟,室温 4000 转/分
离心 10 分钟；
2）取上层液体 5ml 在 50-60℃下氮气吹干；
3）用 1ml 正己烷溶解干燥的残渣,再加入 0.5ml 复溶液,混
合 30 秒,室温 4000转/分离心 5 分钟；
4）去除上层有机相,取下层水相 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：1 检测下限：0.025ppb
5.3.6 牛奶样本处理方法
1）将牛奶样本 15℃4000转/分离心 10分钟,去除上层脂肪,
取 5ml 去脂肪奶样于 50ml 离心管中,加 250ul 亚硝基铁氰化
钾溶液（配液 1）振荡混合 30 秒,加 250ul 硫酸锌溶液（配
液 2）振荡混合 30 秒,15℃4000 转/分离心 10 分钟；
2）取上层液体 2.2ml（相当于 2ml 鲜奶）于另一离心管中,加
入 4ml乙酸乙酯振荡 2 分钟,室温 4000 转/分离心 10 分钟；
3）取上层液体 2ml在 50-60℃下氮气吹干；
4）用 0.5ml 复溶液溶解干燥的残渣,混匀；
5）取 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：0.5 检测下限：0.0125ppb
（检测下限 0.0125ppb,定量下限 0.025ppb,因某些样本
有干扰建议以 0.075ppb作为阳性判定值）
5.3.7 奶粉样本处理方法
1） 取 2±0.05g 奶粉于50ml 离心管中, 用 10ml去离子水溶解,
加入1ml 亚硝基铁qing化钾溶液 （配液 1） 和1ml 硫酸锌溶液 （配
液 2）振荡混合,15℃4000 转/分离心 10 分钟；
2）取上层液体 3.6ml（相当于 0.6g 奶粉）于另一离心管中,
加入 6ml 乙酸乙酯振荡 5 分钟,室温 4000转/分离心 10 分钟；
3）取上层液体 4ml在 50-60℃下氮气吹干；
4）用 0.4ml 复溶液溶解干燥的残渣,混匀；
5）取 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：1 检测下限：0.025ppb
（检测下限 0.025ppb,定量下限 0.075ppb,因某些样本有干
扰建议以 0.075ppb作为阳性判定值）
5.3.8 蛋类样本处理方法
1）取 3±0.05g 均质的蛋类样本于 50ml 离心管中,加 9ml 乙
腈-水溶液振荡混合 2 分钟,15℃4000 转/分离心 10 分钟；
2）取上层液体 3ml 于另一离心管中,加入 3ml 去离子水,再
加 4.5ml 乙酸乙酯振荡 1 分钟,15℃4000 转/分离心 10 分钟；
3）取全部上层液体在 50-60℃下氮气吹干；
4）用 1ml 正己烷溶解干燥的残渣,再加入 2ml 复溶液,混合
30 秒,室温 4000转/分离心5 分钟；
4）去除上层有机相,取下层水相 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：2 检测下限：0.05ppb
（检测下限 0.05ppb,定量下限 0.15ppb）
5.3.9 饲料样本处理方法
1）取 2±0.05g 均质的饲料于 50ml 离心管中,用 2ml 去离子
水溶解,再加入 6ml 乙酸乙酯振荡 2 分钟,15℃4000转/分离
心 10 分钟；
2）取上层液体 3ml载 50-60℃下氮气吹干；
3）用 1ml 正己烷溶解干燥的残渣,再加入 1ml 复溶液,混合
30 秒,室温 4000 转/分离心 5 分钟；
4）去除上层有机相,取下层水相 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：1 检测下限：0.025ppb
5.3.10 水样本处理方法
1）取 0.5ml 澄清水样于 1.5ml 离心管中,加入0.5ml 2×浓缩
复溶液,振荡 1 分钟；
2）取 50μl 进行分析。
样本稀释倍数：2 检测下限：0.05ppb
6 酶联免疫试验步骤
将所需试剂从 4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡 30min
以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,
每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框
架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于 2-8℃。
实验开始前,用去离子水将 20×浓缩洗涤液按 20 倍稀释
成工作洗涤液。
6.1 编 号：将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本
和标准品做 2 孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应：加标准品或样本 50µl/孔到各自的微孔中,然
后加抗体工作液 50µl/孔,轻轻振荡 5 秒混匀,25℃避光反应
30 分钟。
6.3 洗 涤：将孔内液体甩干,用工作洗涤液 250µl/孔充分
洗涤 5 次,每次间隔 30 秒,zui后用吸水纸拍干（拍干后未被齐一生物科技（上海）有限公司

清除的气泡可用干净的枪头刺破） 。
6.4 加酶反应：加酶标记物 100µl/孔,25℃避光反应 30分钟。
6.5 洗 涤：同上
6.6 显 色：加底物液 A 50µl/孔,再加底物液 B 50µl/孔,
轻轻振荡 5 秒混匀,25℃避光显色 15 分钟。
6.7 终 止：每孔加入终止液 50µl,轻轻振荡混匀,终止反
应。
6.8 测吸光值：用酶标仪于 450nm 处测定每孔吸光度值（建议
用双波长 450/630nm） 。测定应在终止反应后 10 分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸
光度值的平均值（双孔）除以*个标准液（0ppb）的吸光度
值,再乘以 100%,即
百分吸光度值（%）＝ A
×100%
A0
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标,对应的标准液浓度（ppb）
的对数为横坐标,绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分
吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓
度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的
准确、快速分析。 （索取）
8 注意事项
8.1 室温低于 25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致
所有标准的 OD 值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲
线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行
下一步操作。
8.3 混合要均匀,洗板要*,在 ELISA 分析中的再现性,很
大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中, 用盖板膜封住微孔板, 避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试
剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0 标准的吸光
度值小于 0.5 个单位（A450nm< 0.5 ）时,表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。
9 贮藏及保存期
储藏条件：试剂盒于 2-8℃保存,避免冷冻。
保 质 期：该产品有效期为 1 年,生产日期见包装盒。
【生产企业】
企业名称：齐一生物科技（上海）有限公司
氯霉素检测试剂盒使用说明书-齐一生物试剂盒