当前位置:上海抚生实业有限公司>>PCR相关试剂>>miRNA检测系列>> A-PJ1079全血microRNA提取试剂盒
商品属性:
产品名称 | 规格 | 货号 |
全血microRNA提取试剂盒 | 25T 、100T | A-PJ1079 |
产品介绍:
描述:生产的全血 miRNA 提取试剂盒是目前世界上提 取小 RNA(<200nt)操作步骤重复性最好、小 RNA 产率最高的方法。使用该试剂盒提取的小 RNA(Small RNA) 中,长度在 15~200nt 范围的 RNA 在 95%以上,基本不含 有大 RNA 和 DNA。使用该试剂通过一步上柱即可获得高纯 度 miRNA,可在 45min 内完成小 RNA 的提取。该试剂盒适 用于冻存和新鲜的抗凝全血样本(注意该试剂盒不适用于血 清和血浆)。
储存:室温可保存 2 年。
使用防护建议:miRNA Reagent A 溶液中含有胍盐,其具有强烈的腐蚀性,试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施,如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗,再另行就医。
自备试剂:异丙醇、乙醇、75%异丙醇
操作方法:
(1) 向 1.5ml EP 管中加入 300μl miRNA Reagent A。将150μl 抗凝全血加入到上述 300μl miRNA Reagent A 中,立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置 5min 以充分裂解细胞。
(2) 向上述裂解完毕的裂解液中加入 250μl miRNA ReagentB,上下颠倒混合均匀。13,000rpm 离心 5min,吸取 550μl上清液,转移到新的 1.5ml EP 管中。
(3) 向上述溶液中加入 200μl 无水乙醇,手腕用力震荡数次,室温放置 5min。
(5) 13,000rpm 离心 10min,转移 700μl 上清液到新的 1.5mlEP 管中。
(6) 向上述溶液中加入 300μl 异丙醇,手腕用力上下颠倒数次。
(7) 分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中,13,000rpm离心 1min,倒掉过滤液。
(8) 向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次,13,000rpm离心 1min,倒掉过滤液。
(9) 向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇洗涤一次,13,000rpm离心 1min,倒掉过滤液。
(10) 吸附柱 13,000rpm 空离心 2min,去掉残留的乙醇。
(11) 将吸附柱放入到新 1.5ml EP 管中,室温放置 2min,使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入 30μl RnaseFree TEBuffer,室温静置 2min,13,000rpm 离心 2min,洗脱产物即为提取的 miRNA。。
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