当前位置:上海抚生实业有限公司>>PCR相关试剂>>其他DNA/RNA聚合酶>> A-PJ1058Hi T7 RNA Polymerase
商品属性:
产品名称 |
规格 |
货号 |
Hi T7 RNA Polymerase |
10KU |
A-PJ1058 |
产品介绍:
Hi T7 RNA Polymerase对 T7 噬菌体启动子具有高度的特异性,并可以其作为启动子,DNA 作为模板体外合成正义链。双链线性质粒 DNA、PCR 产物均可作为该酶的底物模板。Hi T7 RNA 聚合酶经电子重构架及库筛选,与 Wild型比较来看,酶的 DNA 模板结合区域亲和力更高,使其具有持续合成能力,从而获得更高的产量,并易于长片段RNA 的合成。该酶为重组纯化制品,无 DNase 和 RNase污染。
活性定义:在标准反应体系下,37℃ 1 小时内将 1 nmol的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。
储存:置于-20°C 可保存 2 年,如有白色沉淀析出,37°C温浴 5min 后使用,不影响性能。
热失活:75°C,10min。
2.37℃孵育 2-3h (通常 3h,即可获得>80 μg 的总产量)。
3.反应完毕后,如需去除模板 DNA,加入 Dnase I(2U)37℃处理 15min。
4.终止反应:75℃加热 10min,或加入 2 μl 0.5M 的 EDTA(pH8.0)。
注意事项
1.质粒DNA的质量影响RNA的量和完整性。质粒DNA的浓度越高,生成RNA的质量越高,质粒模板DNA应该无RNase污染.
2.该酶为高产酶,RNA 产量高,在反应完毕后,通常存在肉眼可见的浑浊状态,其为反应副产物焦磷酸镁,此时表明反应剧烈。在下一步 RNA 纯化前,可通过短暂离心去除沉淀物,此过程并不丢失 RNA。
3.通常转录后 RNA 产物浓度在 2-4 μg/μl,因此电泳时,仅需取 0.05-0.1 μl 即可。
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