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货号 | 产品名称 | 规格 |
AS632168 | 植物类黄酮测试盒(比色法) | 100管/96样 |
AS632168 | 植物类黄酮测试盒(比色法) | 50管/48样 |
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
类黄酮是一类多苯化合物,属于植物次生代谢物,对人体具有消炎,抗菌,降血脂,清除体内羟自由基,预防癌症等作用。
测定原理
在碱性亚硝酸盐溶液中,类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物,测定样品提取液在510nm处的吸光值,即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:60%乙醇,自备。
试剂一:液体1mL×1管,4℃保存。
试剂二:液体1mL×1管,4℃保存。
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。
类黄酮提取
将样本烘干至恒重,粉碎,过40目筛之后,称取约0.02g,加入2mL提取液,60℃振荡提取2h,10000g,25℃,离心10min,取上清待测。
测定操作表
分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至510nm,蒸馏水调零。
操作表
空白管 | 测定管 | |
样本待测液(µL) | 108 | |
蒸馏水(µL) | 108 | |
试剂一(µL) | 6 | 6 |
混匀,25℃静置6min | ||
试剂二(µL) | 6 | 6 |
混匀,25℃静置6min | ||
试剂三(µL) | 80 | 80 |
混匀,25℃静置15 min,测定510nm处吸光值。ΔA=A测定-A空白,空白管只要做一管。 |
类黄酮含量计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 5.02x+0.0007,R2 = 0.9996
类黄酮含量(mg/g 干重)=(ΔA -0.0007)÷5.02÷(W÷V样总)= 0.398×(ΔA -0.0007)÷W
V样总:加入提取液体积,2.5mL; V样:反应中样品体积,0.108mL; W:样品质量,g
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 2.51x+0.0007,R2 = 0.9996
类黄酮含量(mg/g 干重)=(ΔA -0.0007)÷2.51÷(W÷V样总)= 0.797×(ΔA -0.0007)÷W
V样总:加入提取液体积,2mL;V样:反应中样品体积,0.108mL;W:样品质量,g
检出限为10µg/g。
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