当前位置:上海抚生实业有限公司>>生化检测试剂盒>>糖酵解系列>> AS6321159己糖激酶(HK)测试盒(比色法)
产地 | 国产 | 规格 | 100管/96样、50管/48样 |
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级别 | 其他 |
本网站销售的所有产品均不得用于人类或动物之临床诊断或治疗,仅可用于工业或科研等非医疗目的。
货号 | 产品名称 | 规格 |
AS6321159 | 己糖激酶(HK)测试盒(比色法) | 100管/96样 |
AS6321159 | 己糖激酶(HK)测试盒(比色法) | 50管/48样 |
测定意义
HK(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶,催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
测定原理
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体20mL×1瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;
样本的前处理
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
样本测定
(1)在试剂二中加入18mL试剂一充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2)在试剂三中加入1mL试剂一,充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三和180μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
注意:不同匀浆组织中HK活力不一样,做正式试验之前请做1-2只预试,若ΔA>0.5,则说明组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液(计算公式中乘以相应稀释倍数),或缩短反应时间至2min,使ΔA<0.5,以提高检测灵敏度。
HK活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)HK活性
单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=643×ΔA
2、组织、细菌或细胞中HK活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)HK活性
单位的定义:每毫升血清(浆)在每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=1286×ΔA
2、组织、细菌或细胞中HK活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=1286×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
HK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=2.572×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
公司正在出售的产品:
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anti-ryanodine antibody ELISA Kit | Cullin9蛋白ELISA试剂盒 |
Clock同源物ELISA试剂盒 | Enah/Vasp样蛋白ELISA试剂盒 |
Discs大同源物关联蛋白5ELISA试剂盒 | IgG-Fc片段低亲和力受体ⅢbELISA试剂盒 |
大鼠生长激su(GH)ELISA检测试剂盒 | 大鼠蛋白磷suanmei(PP) 试剂盒 ELISA |
集聚蛋白ELISA试剂盒 | 人中性粒细胞防御su3(DEFA3)ELISA试剂盒 |
人内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)试剂盒ELISA | GasderminA蛋白ELISA试剂盒 |
鸡γ干扰su(IFN-γ)检测试剂盒elisa | 鸽子源性成分PCR试剂盒 |
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伪旋毛虫PCR检测试剂盒 | ANX-Ⅴ 大鼠膜联蛋白ⅤELISA检测试剂盒 |
B细胞分化因子(BCDF)ELISA试剂盒 | 回归热疏螺旋体PCR检测试剂盒 |
B细胞连接蛋白(BLNK)ELISA试剂盒 | 水牛正痘病毒PCR检测试剂盒 |
血小板衍生生长因子B(PDGFB)ELISA试剂盒 | B-Raf原癌基因丝氨suan/苏氨suan蛋白激(BRAF)ELISA试剂盒 |
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