当前位置:上海抚生实业有限公司>>生化检测试剂盒>>脂肪酸代谢系列>> AS6321204支链淀粉含量测试盒(比色法)
产地 | 国产 | 规格 | 100管/96样、50管/48样 |
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级别 | 其他 |
本网站销售的所有产品均不得用于人类或动物之临床诊断或治疗,仅可用于工业或科研等非医疗目的。
货号 | 产品名称 | 规格 |
AS6321204 | 支链淀粉含量测试盒(比色法) | 100管/96样 |
AS6321204 | 支链淀粉含量测试盒(比色法) | 50管/48样 |
测定意义:
支链淀粉是具有高度分支的多糖,淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响,对于不同比例直、支链淀粉的淀粉的研究具有重要的意义。
测定原理:
利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,利用双波长比色法测定支链淀粉含量。
需自备的仪器和用品:
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体100mL×1瓶;4℃保存;
试剂二:乙100mL×1瓶;4℃保存;(自备)
试剂三:液体100mL×1瓶;4℃保存;
试剂四:液体2mL×1瓶; 4℃保存;
试剂五:液体300uL×1瓶; 4℃保存;
淀粉提取:
称取0.01~0.02g烘干样本(建议称取约0.01g)于研钵中研碎,加入1mL试剂一,充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂二振荡5min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂三充分溶解,90℃水浴10min,冷却后待测。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,蒸馏水调零。
测定管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL样本, 14uL试剂四,120uL蒸馏水,2uL试剂五,44uL蒸馏水,混匀,分别测定550和743nm处吸光值,ΔA测定=A550-A743。
空白管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL试剂三, 14uL试剂四,120uL蒸馏水,2uL试剂五,44uL蒸馏水,混匀,分别测定550和743nm处吸光值,ΔA空白=A550-A743。
支链淀粉含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y=0.1214x+0.0076;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr
2、按样本干重计算
支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y= 0.0607x+0.0076;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.0607 ÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr
2、按样本干重计算
支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.0607÷(W×V1÷V2) =16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
检测限为10mg/g干重或0.1mg/mgprot。
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