雪腐镰刀菌PCR检测试剂盒说明书 返回列表页

特点：
高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
高灵敏度：检测灵敏度可达10~100；
操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

样品 DNA 的制备：
1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头，在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

FABP2/I-FABP抗體,兔多抗,抗原親和純化5mgELISA   西红花苷 CROCIN(AS)

人卷曲螺旋域包含蛋白82(Coiled-coildomain-containingprotein82)ELISA试剂盒526-07-8 20mgSesamolin HPLC≥98 31.2-2000 pg/mL芝麻林素

Angiotensinogen/SerpinA8/AGT抗體,鼠單抗38647-10-8HPLC≥98%A010520mg/支FCM   IF   ICC/IF  雷公藤乙素

ELISAKitforHumanComplementC328957-04-2 20mg Oridonin 3.12-200 U/L冬凌草素

CXADR抗體,兔單抗C21H20O10Aloe-emodin-3-CH2-O-β-D-glucopyranoside HPLC≥98%ELISA   芦荟大黄素-3羟基-O-葡萄糖苷

人白细胞抗原B27(HLA-B27)ELISA试剂盒53931-25-210mg  Hederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl ester 0.312-20 ng/mL常春藤皂苷元-28-O-β-D-葡萄糖酯苷

革兰氏染色液20mg 5ml*8核黄素腺嘌呤二核苷酸二钠 FAD

ELISAKitforHumanGhrelinO-acyltransferase100mg 0.312-20 ng/mL3,4-二羟基苯乙酸 DIHYDROXYPHENYLACETIC ACID, 3,4-(RG)

小鼠胰胰岛细胞 20mg HPLC≥95%Agrimol B用于鉴别5 x 10^5 cells/T25培养瓶仙鹤草B

人磷脂酶D2(PLD2)ELISA试剂盒25mg 0.78-50 ng/mL阿吗灵 AJMALINE(P)

ER培养基（含维生素）/ErikssonMediumwithvitaminsASBC3017BR5-氨基荧光素

ELISAKitforHumanE3ubiquitin-proteinligaseUBR42 x 5mg 0.625-40 ng/mL马兜铃酸标准品试剂盒 ARISTOLOCHIC ACID STANDARDS KIT(P)

小鼠颈动脉平滑肌细胞 20mg HPLC≥98%Cyanidin-3-O-glucoside chloride用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶矢车菊素-3-O-葡萄糖苷；花青素

TrkC/NTRK3抗體,兔單抗20mg/支HPLC≥98%10309-37-2ELISA   补骨脂

人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)ELISA试剂盒5088-75-5 20mgNeoliquiritin HPLC≥98% 0.156-10 ng/mL新甘草苷

EB增菌肉汤培养基基础/EB增菌液/EBEnrichmentBrothMediumASBC2001单核细胞增生李氏特菌增菌2'-脱氧鸟苷

雪腐镰刀菌PCR检测试剂盒说明书土槿皮丙酸  A0720 Tie1抗體(PE),鼠單抗

Giemsa stain 姬姆色素染料  1g M17琼脂

黄芪皂苷Ⅲ；黄芪皂甙Ⅲ  HPLC≥98% Astragaloside III 人关节炎滑膜成纤维细胞 用于含量测定

氯化缬草素 20mg valechlorine ELISAKitforHumanAcrosin HPLC≥98%

DODECA-2(E),4(E)-DIENOIC ACID ETHYL ESTER(SG)  5mg ELISAKitforHumanSerumparaoxonase/arylesterase2

隐绿原酸（4-咖酰奎宁酸） HPLC≥99% A0024 CTLA-4/CD152抗體,鼠單抗 20mg/支

1-丁 1-Butanol >99.0%(GC)  25ML 人LIM同源框转录因子1-betaELISA试剂盒

小白菊内酯 HPLC≥98% A0385 CD200R1抗體,鼠單抗 20mg/支