引言

Vero细胞是一种贴壁依赖性细胞,广泛应用于病毒疫苗生产平台。今天我们将为大家以一则应用分享：LeProlif®️ Sphere球状微载体培养Vero细胞生产疫苗的巨大潜力。

研究过程：在2L和10L的LePhinix®️ EZG台式生物反应器中无菌接入LeProlif®️ Sphere球状微载体培养Vero细胞,通过反应器控制工艺流程,采用批次培养模式培养细胞,并观察最终细胞增殖及放大培养效果。

材料&方法

本次研究主要采用的耗材&设备

LeProlif®️ Sphere球状微载体

LeProlif®️ Sphere球状微载体是一种用于高产量培养贴壁细胞的微球状载体,为动物细胞的生长提供了适宜的表面,并可用于悬浮培养系统中。还可用于增加单层细胞培养容器(例如培养板、培养皿及培养瓶)及灌流室中的细胞产量。

• 以交联葡聚糖为基底

• 贴壁面积约为4400cm2/g

• 特殊的材料表面改性工艺提高细胞贴壁率及均匀度,支持高密度灌流培养

• 可在台式生物反应器/一次性生物反应器内进行悬浮培养,方便放大

• 可将细胞从微球表面消化下来进行收货

LePhinix®️ EZG台式生物反应器

• 球状载体湿热灭菌后通过接管机无菌焊接后接入反应器内

• 可搭配不锈钢筛网进行灌流培养,将微载体截留在罐内进行换液操作或者收获细胞

• 工作体积：1 L - 10 L

• 1 个 10 L 台式生物反应器最高可培养 10 L ,载体浓度为3g/L,提供的细胞贴壁面积达到了132000cm2

研究步骤

01.接种

种子细胞在T-flask里培养制备,最终接进2L的LePhinix®️ EZG台式生物反应器中。

02.细胞培养设置及放大

我们在2L的LePhinix®️ EZG台式生物反应器中无菌接入LeProlif®️ Sphere球状微载体,针对Vero细胞在球状微载体上的生长进行测试,以掌握Vero细胞在台式生物反应器内的增殖特性,再通过球转球进一步放大至10L台式生物反应器中,为Vero细胞在生产逐步放大中的工艺应用提供了相应的参考。

研究结果

3g/L的载体浓度,1.2E5/mL的细胞接种密度,培养4天,从1.5L球转球放大至4L,再球转球放大至10L,细胞密度可扩增约12倍左右,活率均维持在90%以上,在玻璃罐内不同放大规模中表现出高度的一致性,球转球效果较好,见图1、图2和图3。

图1 Vero细胞球转球放大活细胞密度

图2 Vero细胞球转球放大细胞活率

球转球前

球上细胞消化

球转球后

图3 球转球过程中Vero细胞在微载体上的贴壁情况

研究结论

3g/L的载体浓度下,Vero细胞在罐内培养至第4天达到了1.4×106 cells/mL左右的细胞密度,为了保证球转球放大的成功率,1.4×106cells/mL的细胞密度并非是最高值,且可以通过提高载体浓度来提高最终的细胞密度。

在LePhinix®️ EZG台式生物反应器中,LeProlif®️ Sphere球状微载体具备能有效实现生产逐步放大工艺的能力。

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