含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒。

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒兼具了传统 RNAi 载体的优势（稳定表达和使用病毒递送的能力）与组织特异性表达和同一转录物中多次靶标基因敲低能力。 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒和 BLOCK-iT™ 慢病毒 Pol II miR RNAi 表达系统设计用于表达人工 miRNA,其经基因工程改造后具有靶序列 99% 同源性,将导致靶标切割。使用 Invitrogen' 优质 BLOCK-iT™ RNAi Designer,70% 以上的构建体产生超过 70% 的敲低。Invitrogen Pol II 表达载体家族包括：

–CMV 立即早期启动子的强表达,可选择通过 MultiSite Gateway™ 重组使用组织特异性或其他调节启动子。
–与许多用于基因表达的 Invitrogen' Gateway™ 目的 (DEST) 载体的兼容性。

–使用新的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒（含 EmGFP）控制 RNAi 响应启动的能力。
–含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ HiPerform™慢病毒 PolII miR RNAi 表达系统中一种新的目的载体。新载体含有一个 mRNA 稳定序列 (WPRE) 和一个核导入序列 (cPPT),可产生高达 5 倍的病毒滴度和 EmGFP 表达水平。此外,从小鼠 Pgk-1 启动子中表达杀稻瘟菌素抗性,以避免多次传代后关闭。

–祖母绿 GFP (EmGFP) 的协同顺反子表达,导致 EmGFP 表达与 miR RNAi 敲低相关。

–在同一转录物上表达一个以上的经基因工程改造 miR RNAi 序列,允许同时敲低多个基因并产生合成表型

新的含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 诱导型 Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒提供了调节 RNAi 实验的能力。该试剂盒含有 pT-REx-DEST30 Gateway™ 载体,在简单克隆和穿梭技术后,产生适用于诱导型敲低的 miR RNAi 表达载体。pT-REx-DEST30 Gateway™ 载体包含带有两个四环素操纵基因 (tetO2) 序列拷贝的 CMV 启动子,允许高水平和调节表达。 这允许在稳定转染细胞系中进行功能丧失研究,即使目的基因是必需的也可进行研究。此外,在基因功能恢复期间,可以停止 miR RNAi 表达的诱导,因此可以测量表型变化。

对于多种表达选项,包含 EmGFP（仅 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体）、miR 侧翼区和与目标靶标同源的 miRNA 的 miR RNAi 盒可轻松地转移到多种 DEST 载体中。这通过 Gateway™ 重组反应发生,在该反应中,将 miR RNAi 盒转移至 pDONR™ 载体中（BP 反应）,然后转移至 DEST 载体中（LR 反应）。HiPerform™ 系统具有用于高病毒滴度和 EmGFP 表达的新 pLenti6.4/RF R2/V5-DEST 目的载体。