蛋白质电泳和蛋白质印迹
蛋白质印迹是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的实验方法。其基本原理是用特定抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样本染色。通过分析着色的位置和深度,可以获得被分析细胞或组织中特定蛋白质的表达信息。
SDS-PAGE凝胶试剂盒
货号 (SKU) 包装规格
S665689-200gels 200-300gels
S665689-40gels 40-60gels
基本描述
英文名称：SDS-PAGE Gel Kit
储存温：度2-8°C储存
运输条件：冰袋运输
产品内容
组分40-60 gels200-300 gels
30%Acr-Bis(29:1)100ml2×250ml
SDS-PAGE Separating Gel Buffer (4×)100ml500ml
SDS-PAGE Stacking Gel Buffer (4×)50ml250ml
APS0.5g2.5g
TEMED1ml5ml
本产品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末,使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5 ml纯水、2.5 g APS加25 ml纯水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。
产品简介
本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂,只需自备纯水,即可制备高质量各 种浓度的变性PAGE凝胶,方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已 加入10%SDS,使用时不用另外加入。
SDS-PAGE凝胶试剂盒注意事项
1.10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用
-20度保存的10%APS。
2.PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关;在其它条件不变的情况下,可通过改变APS及TEMED的用量,控制PAGE凝胶的聚合速度,凝胶聚合过快不利于操作;附表中的APS及TEMED量可供参考,应根据实际操作情况做适当的调整。
3.在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
4.在分离胶上层加纯水时要小心操作,加水时速度不能太快。
5.丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
6.本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
I灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表3)
1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer和纯水在小烧杯或试管中混合。
3.加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端
1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可), 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层, 使凝胶表面保持平整。
5.静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表2)
1.去除覆盖在分离胶上的水层。
2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3.加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6.静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
7.待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
8.进行常规电泳操作。
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