Matrix标准型含酚红基质胶
基底膜是动物体内上皮细胞基底面的一层基质膜。LYNJUNE®Matrix是从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠肿瘤组织提取的基底膜成分,所形成的基质胶。该基质胶主要成分为laminin,collagen IV,heparan sulfate proteoglycans(Kleinman et al.1986)。同时,该基质胶也包含多种生长因子,例如表皮生长因子EFG,血小板衍生生长因子PDGF,神经生长因子NGF,碱性成纤维细胞生长因子FGF-2,乙型转化生长因子TGF-beta和胰岛素样生长因子ILGF(Vukicevic et al.1992)。
产品来源：
Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠肿瘤基底膜成分
产品储存：
建议您融化后先按照单次用量进行分装,保存-20°C冰箱,有效期2年。
产品性质：
本品在4°C条件下为液态,但在加热到37°C时呈凝胶状态。基质胶凝固后,重新放回4°C过夜,基质胶可再次液化。
注意事项：
该基质胶在温度高于10°C时就会开始凝固成胶,所以尽量在冰上操作基质胶。类器官传代时,如果为了避免酶对类器官造成影响,可直接用4°C预冷的基础培养基对基质胶进行缓慢吹打,即可将类器官从基质胶中释放出来。
产品应用：
本品适用于类器官生长、分化、代谢和毒理学研究,体内和体外血管生成实验。
操作方法：
一、肿瘤类器官药敏实验(操作所需时间为2小时)
1.将扩增好足够量的肿瘤类器官(实验组)以及正常类器官(对照组)用4°C预冷的基础培养基进行重悬,缓慢机械吹打,促进胶液化溶解,并保持类器官结构完整(可用于悬浮培养于有5%基质胶溶液的基质胶表面)(Guillen et al.2022)。或者通过TryplE酶消化获得单细胞悬液。
2.离心收集类器官细胞,并进行细胞计数。
3.加入LYNJUNE®基质胶原液,与细胞进行混匀。
4.将细胞与胶的混合物,通过排枪加入37°C预热过的96孔板,或者384孔板,立即将孔板放入培养箱。
5.大约10min后,LYNJUNE®基质胶将凝固,加入相应体积的类器官培养液进行培养。
6.类器官形成后(如果是机械吹打,类器官将在传代24h后就会形成;如果是酶消化,类器官会在3-5天后形成),每个孔分别加入含有PI染料以及不同种类、不同浓度的待筛选的抗肿瘤药物。
7.用高内涵显微镜上进行活细胞成像,测定肿瘤类器官对各种药物的敏感性。
二、血管生成实验(以永生化HUVEC细胞系为例,操作所需时间为1小时)
1.将培养基换成饥饿细胞用培养基：加入含0.2% FBS,2mM L-gaxa,1mM丙酮酸钠,100U/ml青ms和100µg/ml链ms的DMEM培养基培养24小时。
2.将LYNJUNE®基质胶均匀铺满96孔板底。注意：枪头需提前预冷半小时。尽量在冰上操作,避免基质胶过早固化,避免气泡产生。
3.将96孔板在细胞培养箱孵育30min,固化基质胶。
4.消化HUVEC细胞,并计数。
5.将200µL的HUVEC细胞悬液(含5X10^4个细胞)加于含基质胶的96孔板中。将96孔板放于培养箱。
6.血管样网络结构将于3至12小时间形成。
7.在血管网络形成时,小心去除培养基,并用加入含活细胞染料1/1000 Calcein AM(绿色)的培养基进行染色,并用显微镜进行拍照记录。
三、神经轴突3D生长实验(以大鼠胚胎神经干细胞为例,操作所需时间为2小时)
1.取孕期12-15天的大鼠胚胎,用眼科剪和眼科分离出大脑皮层于4°C预冷的DMEM培养基中。
2.用吸管轻缓吹打,然后用70µm滤网过来,获得单细胞悬液,并进行细胞计数。
3.离心(300g,3min),弃上清。将细胞与LYNJUNE®基质胶进行混合,然后将基质胶混合物滴加在24孔板中,每孔50µl。
4.将24孔板放于培养箱,大约10min后,LYNJUNE®基质胶将凝固。加入1mL神经元分化培养基：Neurobasal medium,2% B27, 2mM L-glutamine,5%FBS,20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF,100U/mL penicillin和100 µg/mL streptomycin。第二天开始,就能观察到有明显的神经轴突生长。
5.在第7天可观察到大量的神经突(Neurite)长出。
仅 供 研 究 用 途 ,不 得 用 于 诊 断 或 治 疗 程 序 。
Matrix标准型含酚红基质胶本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。
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