【适用范围】
T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）是一种是一种来源于T7噬箇体的RNA聚合酶,分子量约99kDa。专门催化5'→3'方向的RNA形成过程,对T7噬箇体启动子具有高特异性。T7 RNA聚合酶是一种DNA 依赖性的RNA 聚合酶,能够在体外以单链或双链DNA为模板,从启动子开始催化模板DNA下游5'→3' RNA 合成,具有高的转录效率。
【产品组分】
组分 |
体积 |
T7 RNA聚合酶（1mg/mL） |
20μL |
5×Transcription Buffer |
50μL |
1×Transcription Buffer: 40 mM Tris-HCl, pH 7.8, 20 mM NaCl2, 6 mM MgCl2, 2 mM spermidine-HCl, 10 mM DTT
【储存条件及效期】
T7 RNA聚合酶于-20 ℃保存,有效期为24 个月。
【热失活】
70℃,10min
【反应体系及条件】
组分 |
体积 |
5×TranscriptionBuffer |
10μL |
ATP/GTP/CTP/UTP(25mM each) |
4μL |
T7 RNA Polymerase（1 mg/ mL） |
5μL |
RNase Inhibitor（40 U/μl） |
1μL |
DNA模板 |
1μg |
DEPC-treated Water |
Up to 50μL |
a.37度孵育2小时
b.如需去除DNA模板,加入2μL DNase I（1U/μl）终止反应
c.终止反应：加入2 μL 0.2 M EDTA(pH8.0)或者 70°C反应10 min。
【注意事项】
1.转录反应体系的配制应在无 RNase 污染的环境中完成,操作过程建议佩戴手套以及口罩,使用高压灭菌的水及枪头。
2.该酶活性强,对模板DNA纯度要求不高,PCR产物经乙醇沉淀后可直接用于转录。
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