一、样品的采集
采样过程中样本不得交叉污染,采样及样品前处理过程中须戴一次性手套。采集发病动物或同群动物的口腔液、全血、血清、病料组织、饺子、（如脾脏、扁桃体、淋巴结、肾脏和骨髓,样品可研磨充分后离心取上清、也可用拭子充分擦拭脏器表面或蘸取匀浆液）等。采集的样品如不及时使用应在冷藏（-20°C）和密封状态下运输到相关实验室后,-80℃冷冻保存。
二、样品前处理与核算提取
参照相关标准采集样品,短期保存于-20℃,长期保存请放置于-80℃。
1.血清：用一次性抽取静脉血 2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温放置 30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或 直接使用水平离心机,3000rpm 离心 5min,吸取上层血清,转移至 1.5mL 灭菌离心管中备用。
2.血浆：用一次性抽取静脉血 2mL,注入含 EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合 5-10 次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min 后即可分离出血浆,转移至 1.5mL 灭菌离心管中备用。
3.拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入 500 μL PBS 或生理盐水,剧烈振荡 30s,转移至1.5mL 灭菌离心管中备用。
4.病灶组织样品：称取组织约 0.1g 于研磨器或组织匀浆器中研磨(置于冰上或加入液氮),再加 1mL 生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至 1.5mL 灭菌离心管中备用。
5、饺子：取饺子馅料约 0.1g,于研磨器或组织匀浆器中研磨(置于冰上或加入液氮),再加 1mL 生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至 1.5mL 灭菌离心管中备用。
动物总 DNA/RNA 提取试剂盒适合于快速从动物组织、血液、分泌物、排泄物等动物样
品中提取高纯度的包含病毒、细菌及寄生虫等生物的总核酸。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,
提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀,获得的核酸可直接用于 PCR/RT-PCR、Sorthern 杂交/Northern 杂交、以及 LAMP/RT-LAMP 等系列下游实验。
三、样品检测
本试剂盒适用于动物病料、、血液等样品中非洲猪瘟病毒的特异检测,适用于非洲猪瘟病毒（ASFV）的辅助诊断、监测及流行病学调查,检测结果仅供临床参考, 检出限为 10 2 copies/μl。
四、结果判定
4.1 质控标准
4.1.1阴性对照无Ct值并且无扩增曲线。
4.1.2 阳性对照的Ct值应小于等于45,并出现典型的扩增曲线。
4.1.3 如阴性和阳性对照不满足以上条件,此次实验视为无效。
4.2 结果判定
4.2.1 阴性：无Ct值,且无特征性扩增曲线,表明样品为阴性。
4.2.2阳性：Ct值≤60,且出现典型的扩增曲线,表示样品为阳性。
五、检测速度
检测时间总检测耗时45-60分钟。
五、设备和耗材
序号 |
产 品 名 称 |
规格 |
价格（元） |
配套 |
厂家 |
1 |
HYG-16YB动物疫病检测套装 |
16孔套装 |
65000 |
含HYG-16YB动物疫病检测仪、恒温金属浴、迷你离心机、可调式涡旋振荡器各1台,移液器3支 |
上海瑞鑫 |
2 |
非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
48T |
3000 |
A-ASFV-I 22μL× 48 管 B-I 90μL × 1 支 PG-ASFV-I 50μL × 1 支 |
上海瑞鑫 |
3 |
非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸检测试剂盒（LAMP法） |
48T（已包含提取试剂盒） |
4200 |
1.2×LAMP Buffer 625μL 2. 引物液275μL 3.BST酶75μL 4.CMR染料25μL 5. 阳性对照500μL 6.DEPC水1000μL 7. 矿物油1000μL |
上海瑞鑫 |
4 |
冰箱 |
保存试剂 |
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