兔尿游离皮质醇（UFC） ELISA 试剂盒 说明书

兔尿游离皮质醇(UFC) ELISA 试剂盒
操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

兔尿游离皮质醇(UFC) ELISA 试剂盒
Elisa试验操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法
1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡至少30分钟。
2 加样 可能原因： 1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2）手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法： 1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟；若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育 可能原因： 1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*； 2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法： 1) 贴封片或加盖； 2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*；洗板针堵塞,抽吸不*；洗板不畅,导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法： 1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 显色 可能原因： 1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法： 1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流； 3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸；尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时做好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。

ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。我公司将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期提高试验质量。

兔尿游离皮质醇(UFC) ELISA 试剂盒
笃玛生物关于试剂盒的优势：
1.高效,灵敏,特异的抗体
2.稳定的重复性和可靠性
3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高和固相载体
4.适用血清,血浆,组织匀浆液,细胞培养上清液,尿液等多种标本类型